小鼠脐带间充质干细胞的分离培养方法

摘要

本发明涉及一种小鼠脐带间充质干细胞的分离培养方法，属于细胞体外培养领域；此方法是对“组织贴壁法”的改良和创新，本发明首先将孕龄达15-19天的孕鼠串珠样受孕子宫取出，放入含青霉素和链霉素双抗的PBS中浸泡；然后分离出脐带组织，放入含青霉素和链霉素双抗的PBS中洗涤并浸泡，其后置于培养基中剪碎、培养；当P0代细胞生长融合达80-90%时，用0.25%的胰酶消化传代培养，持续传代直至细胞呈现均一形态，本发明中所用培养基为F12/DMEM，并且添加了胎牛血清；使用本发明分离和培养方法能够获得大量高活性高纯度的小鼠脐带间充质干细胞，并且在长期传代中仍能维持干细胞的活性；本发明解决了小鼠实验动物模型构建中移植方式受限的问题，还为相关疾病细胞分子机制的研究提供依据。

主权项

一种小鼠脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，按照以下步骤进行：（1）将孕鼠断颈处死，放入消毒酒精中浸泡，于超净工作台中取出，腹部朝上置于无菌10cm大皿中；（2）用无菌眼科剪和镊子将孕鼠腹部表皮和粘膜层逐层剪开，取出串珠样受孕子宫，放入含有青霉素和链霉素双抗的PBS中浸泡；（3）用无菌眼科镊子将每只胎鼠剥离出来，剔净羊膜层，再配合眼科剪分离出连接胎鼠肚脐与胎盘的脐带组织，放入含有青霉素和链霉素双抗的PBS中洗涤并浸泡；（4）将脐带组织浸于含双抗的培养基中，用眼科剪和镊子将其逐根剪碎；（5）将脐带组织块连同培养基均匀铺在细胞培养皿（3.5cm小皿）中，置于37℃细胞培养箱中培养；（6）脐带组织块培养24h到48h后即有细胞爬出，第3天换正常培养基，以后每3天换一次液，当P0代细胞生长融合达80‑90%时，用0.25%的胰酶消化传代培养，持续传代直至细胞呈现均一形态，做下一步的鉴定。