一种水稻高氮利用效率基因的分子标记鉴定方法

摘要

本发明公开了一种水稻高氮利用效率基因的分子标记鉴定方法，属于生物工程技术领域。NRT1.1B是一个高氮利用效率基因，根据野生型NRT1.1B基因与突变型nrt1.1b基因存在的单核苷酸差异，设计由四引物组成的分子标记，加入到同一管PCR反应体系中对不同水稻植株DNA进行PCR扩增。若同时扩增出368bp和243bp两条特征条带，则为含NRT1.1B基因的纯合体；若同时扩增出368bp和177bp两条特征条带，则为含nrt1.1b基因的纯合体；若同时扩增出368bp、243bp和177 bp三条特征条带，则为含NRT1.1B/nrt1.1b基因的杂合体。本发明对NRT1.1B基因的基因型检测不仅快速、便捷、准确，而且操作简单费用低廉，非常适合大批量水稻材料的目的基因鉴定，为水稻资源基因鉴定及分子标记辅助选择育种提供了重要参考。

主权项

一种水稻高氮利用效率基因的分子标记鉴定方法，其特征在于：水稻NRT1.1B是一个高氮利用效率基因；利用高氮利用效率NRT1.1B基因的特异性引物标记，该标记由4条引物组成，包括内外引物各2条，序列如下：正向外引物NRT1.1B‑O‑F：5'‑GATGGAGGCGATGAGGAAGA‑3'；反向外引物NRT1.1B‑O‑R：5'‑GCTGCCAAGAAACACCACAA‑3'；正向内引物NRT1.1B‑I‑F：5'‑TCGTGCACAGCCTCCACTTGCTCGACG‑3'；反向内引物NRT1.1B‑I‑R：5'‑AGGTCGGCGGCGGAGTCGCCGGCTAT‑3'；以上四引物PCR扩增水稻的基因组DNA，若同时扩增出368 bp和243 bp两条特征条带，则为含野生型NRT1.1B基因的纯合体；若同时扩增出368 bp和 177 bp两条特征条带，则为含突变型nrt1.1b纯合基因的纯合体；若同时扩增出368 bp、243 bp和177 bp三条特征条带，则为含NRT1.1B/nrt1.1b基因的杂合体。