利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法

摘要

本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法，包括以下步骤：构建含关岭牛MyoDⅠ基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体；对骨骼肌生长相关的细胞进行培养和铺板；配制启动子重组子/脂质体的混合物，对步骤2）获得的细胞进行转染；通过双荧光素酶报告基因对步骤3）获得的转染细胞进行双荧光素酶活性检测。本发明具有灵敏度高、检测速度快、费用低、不需使用放射性同位素等优点，使用的pGL3-Basic报告基因，因其无启动子和增强子，可通过荧光素酶报告基因的表达来检测插入启动子的启动活性，并且比较启动子的强弱，进而初步确定核心启动子区域。

主权项

一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1）、构建含关岭牛MyoDⅠ基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体；步骤2）、对骨骼肌生长相关的细胞进行培养和铺板；步骤3）、配制启动子重组子/脂质体的混合物，对步骤2）获得的细胞进行转染；步骤4）、通过双荧光素酶报告基因对步骤3）获得的转染细胞进行双荧光素酶活性检测；步骤1）中所采用的引物为8对，引物P0的上游引物的序列为：5′‑ACCTCCCGACATCATACATT‑3′，引物P0的下游引物的序列为：5′‑GAAACCCAGCCGCATCTA‑3′；引物P1的上游引物的序列为：5′‑ ACCTCCCGACATCATACATT‑3′，引物P1的下游引物的序列为：5′‑ GGTTTGGGTTGCTAGACG‑3′；引物P2的上游引物的序列为：5′‑ GTGGAGTTCCGCTTGTTG‑3′，引物P2的下游引物的序列为：5′‑ GGTTTGGGTTGCTAGACG‑3′；引物P3的上游引物的序列为：5′‑ GATATGGAGCTGCTGTCGC‑3′，引物P3的下游引物的序列为：5′‑ AGCCGCTGGTTTGGGTTGC‑3′；引物P4的上游引物的序列为：5′‑ GTGGAGTTCCGCTTGTTG‑3′，引物P4的下游引物的序列为：5′‑ CTCCCCACCCCTACTTTC‑3′；引物P5的上游引物的序列为：5′‑ CTCCCTGATTCGGTAGATC‑3′，引物P5的下游引物的序列为：5′‑ CTCCCCACCCCTACTTTC‑3′；引物P6的上游引物的序列为：5′‑ CTCCCTGCTCTGTTCCTATT‑3′，引物P6的下游引物的序列为：5′‑ AAACTTGCTGCTGTTCTGG‑3′；引物P7的上游引物的序列为：5′‑ TTAGGCTACTACGGGATAAA‑3′，引物P7的下游引物的序列为：5′‑ CTCCCCACCCCTACTTTC ‑3′。