一种肿瘤抗原诱导的DC-CIK细胞的制备方法及应用

摘要

本发明公开了一种肿瘤抗原诱导的DC-CIK细胞的制备方法及应用，所述DC-CIK细胞制备方法中，将肿瘤抗原负载的DC细胞与CIK细胞共培养，可刺激产生肿瘤抗原特异性的T细胞，这样的DC-CIK治疗则兼具特异性和非特异性双重肿瘤杀伤作用，比未负载肿瘤抗原的DC刺激活化的CIK活性更强。在DC-CIK回输30天后，肿瘤患者T淋巴细胞和NK细胞均显著升高，病情得到明显改善。因此，负载特异抗原的DC-CIK细胞可以用于相关抗肿瘤药物的应用。同时，DC-CIK细胞增殖活性高，其增殖倍数平均高达229.85±1.31，是传统方法获得的DC-CIK增殖倍数的2.4倍。

主权项

一种肿瘤抗原诱导的DC‑CIK细胞的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：步骤1、采用血细胞分离机采集肿瘤患者自体外周血单个核细胞，用0.9％生理盐水洗涤后，采用无血清AIM‑V培养基调节细胞密度至1～2×10⁶个/mL；步骤2、将细胞接种于培养瓶，并将培养瓶置于37℃、5％CO₂培养箱孵育2小时后，收集贴壁细胞及悬浮细胞；步骤3、将贴壁细胞置于培养瓶中，并加入DC诱导培养液，然后将培养瓶置于37℃、5％CO₂培养箱中诱导，第3天补加DC诱导培养液，第5天加入肿瘤特异性抗原，第6天加入TNF‑α诱导DC成熟，第7天收获具有肿瘤特异性抗原的成熟DC细胞；步骤4、将悬浮细胞重悬于无血清AIM‑V培养基中，调整细胞密度至1～2×10⁶个/mL，并添加终浓度为1000U/mL的IFN‑γ，然后将培养基置于37℃、5％CO₂培养箱中孵育，第2天添加5％的自体血浆、终浓度为100U/mL的IL‑1α、终浓度为1000U/mL的IL‑2、终浓度为0.5μg/mL的CD3单抗，培养至第5天，补充添加含有IL‑2浓度为1000U/mL的无血清AIM‑V培养基；第7天收获CIK细胞；步骤5、将收获的具有肿瘤特异性抗原的成熟DC细胞和CIK细胞混合培养，得到DC‑CIK细胞。