一种超低分子肝素钠的制备方法

摘要

本发明提供了一种超低分子肝素钠的制备方法，该方法将普通肝素在有机溶剂中进行β-消除降解后得到低分子肝素钠，再经过含ATIII填料柱分离得到高抗FXa活性的超低分子肝素钠的制备方法。本发明提供的制备方法可行且降解条件温和，保证了最终产物的抗凝活性。按照本方法制备的超低分子肝素钠的抗FXa效价在160～220IU/mg、抗FIIa效价在0.5～4IU/mg，平均分子量在2000-3000Da。

主权项

一种超低分子肝素钠的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取精品肝素的水溶液，加入苄索氯铵，得到白色肝素季铵盐固体；(2)上述(1)中的肝素季铵盐固体溶解于有机溶剂中，加入氯化苄得到肝素酯化物；(3)上述(2)中的肝素酯化物溶于水，加入季铵盐，得到白色肝素酯化物季铵盐固体；(4)上述(3)中的肝素酯化物的苄索氯铵溶于有机溶剂中，在有机碱作用下进行β‑消除降解；所述有机溶剂为二甲基甲酰胺；所述有机碱为苄基三甲基氢氧化铵季銨碱、DBU或醇钠，反应温度为10℃～40℃下反应4～24小时；(5)上述(4)中的降解物在氢氧化钠作用下转化为钠盐，得到精品超低分子肝素钠的粗品；(6)上述(5)中的低分子肝素钠粗品配成10％的溶液，0℃～4℃下加入氢氧化钠溶液，调pH在9～10，并在此温度下反应3小时；而后用1M盐酸中和，加入氯化钠至盐度为8～10％，用3倍的甲醇沉淀，沉淀物用甲醇洗涤，真空干燥；(7)上述(6)中的低分子肝素钠粗品配成10％的溶液，加入1M氢氧化钠溶液调pH值为9～10，加入30％的过氧化氢搅拌6小时后，滴加1M的盐酸至中性，然后加入8～10％的氯化钠，再用2.5～3倍的甲醇沉淀低分子肝素钠；过滤，用甲醇洗涤后干燥制得低分子肝素钠的精品；(8)上述(7)中得到的精品低分子肝素通过含ATIII填料柱，以0.15M的氯化钠/0.05M三羟甲基氨基甲烷溶液为淋洗剂，洗去杂质和活性低的分子，然后以1.0M的氯化钠/0.05M Tris溶液为洗脱剂，将超低分子肝素从柱子上洗脱，得到的洗脱液用3倍的甲醇沉淀，过滤，甲醇洗涤，真空干燥；(9)将上述(8)得到的产物溶于水配成10％的溶液后，添加氯化钠至浓度为10％，用3倍体积的甲醇沉淀，过滤，甲醇洗涤，真空干燥得到超低分子肝素钠精品；(10)将上述(9)得到的精品超低分子肝素钠溶解于去离子水配成10％的溶液，用0.2微米的膜过滤后，冷冻干燥，最终得到超低分子肝素钠。