利用竞争性引物的目标碱基序列的检测方法

摘要

一种具有多态性碱基的目标碱基序列的检测方法，该检测方法包括：（a）在具有由包括目标碱基序列的碱基序列组成的目标核酸的核酸试样中，添加至少一种检测用引物、至少一种竞争性引物以及至少一种共用引物的步骤；（b）使所述检测用引物与所述竞争性引物通过竞争与所述目标核酸进行退火，从而合成延伸产物A的步骤、（c）使通过所述步骤（b）或后述步骤（d）而得到的所述延伸产物A与所述共用引物进行退火，从而合成延伸产物B的步骤、（d）使通过所述步骤（c）得到的延伸产物B与所述检测用引物或所述竞争性引物进行退火，从而合成延伸产物A的步骤以及（e）检测所述延伸产物A或B的步骤。

主权项

一种检测用引物、竞争性引物以及共用引物在制造目标碱基序列检测试剂中的应用，其是本质上与具有多态性碱基的目标碱基序列互补的至少一种检测用引物、本质上与所述目标碱基序列互补且通过与所述检测用引物竞争与所述目标核酸进行退火的至少一种竞争性引物、以及至少一种共用引物在制造所述目标碱基序列检测试剂中的应用，其特征在于，所述目标碱基序列的检测包括：(a)在具有由包含目标碱基序列的碱基序列组成的目标核酸的核酸试样中，添加所述检测用引物、所述竞争性引物、以及所述共用引物的步骤；(b)作为模板采用包含所述核酸试样中的多态性碱基的目标碱基序列，使所述检测用引物与所述竞争性引物通过竞争与所述目标核酸发生退火并进行延伸反应，从而合成延伸产物A的步骤；(c)使通过所述步骤(b)或后述步骤(d)而得到的所述延伸产物A与所述共用引物进行退火并进行延伸反应，从而合成延伸产物B的步骤；(d)使通过所述步骤(c)得到的延伸产物B与所述检测用引物或所述竞争性引物进行退火，从而合成延伸产物A的步骤；以及(e)检测所述延伸产物A或B的步骤，而且，通过由荧光色素和吸能物质所组成的组中选出的至少一种标记物质，对所述检测用引物、所述竞争性引物或所述共用引物中的至少一个进行标记；所述检测用引物在3’末端或3’末端的第2个碱基上具有与多态性碱基互补的匹配碱基、以及与所述目标序列中的除多态性碱基以外的碱基非互补的至少一个不匹配碱基；所述竞争性引物包括在3’末端或3’末端的第2个碱基上与多态性碱基非互补的不匹配碱基、以及与所述目标序列中的除多态性碱基以外的碱基非互补的至少一个不匹配碱基；对于所述与除多态性碱基以外的碱基非互补的不匹配碱基而言，在所述检测用引物中位于与所述多态性碱基互补的匹配碱基的第17个碱基以内，在所述竞争性引物中位于与所述多态性碱基非互补的不匹配碱基的第17个碱基以内；所述检测用引物所具有的至少一个不匹配碱基的位置，不同于所述竞争性引物所具有的与除多态性碱基以外的碱基非互补的至少一个不匹配碱基的位置；所述竞争性引物和所述检测用引物的链长之差为16个碱基以内；所述共用引物是与所述检测用引物或所述竞争性引物形成引物对，从而能够使所述目标核酸扩增的引物。