一种过表达猪共刺激受体4-1BB载体及其应用

摘要

本发明提供了一种过表达猪共刺激受体4-1BB载体及其应用。PCR扩增rosa26基因内含子1左右同源臂，4-1BB调控序列，OCT4特异启动子；将同源左臂、4-1BB表达框、含LoxP位点的Cre、Neo表达框、同源右臂、负筛选DTA依次连接，得到4-1BB同源重组载体p4BOCNDR。将该载体与含特异性靶向猪rosa26基因内含子1的sgRNA的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在rosa26基因第一内含子定点整合有4-1BB基因且自动删除标记基因的转基因猪。

主权项

一种4‑1BB基因的同源重组载体，其特征在于，通过以下方法制备得到：以目标生物基因组为模板，PCR扩增左右同源臂，4‑1BB表达框，胚胎期特异性调控元件OCT4；将同源左臂、4‑1BB表达框、含LoxP位点的OCT4调控的Cre表达框和Neo表达框、同源右臂、负筛选DTA依次连接，得到4‑1BB同源重组载体。