一种蝎毒素蛋白包涵体的纯化与复性方法与应用

摘要

本发明公开了一种蝎毒蛋白包涵体的纯化与复性方法，主要是利用重组大肠杆菌表达蝎毒蛋白，且在蝎毒蛋白的C端含有His-tag，然后利用变性缓冲液使蝎毒蛋白中的二硫键打开，用组氨酸亲和层析柱纯化变性的蝎毒蛋白，再利用复性缓冲液对蝎毒蛋白进行复性，所述的复性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/L Na₂HPO₄，10～100mmol/L Tris，0.1～1mol/L L～Arg，1～5mmol/L EDTA，0.1～5mmol/L GSH，0.05～0.5mmol/L GSSG，5～20％(v/v)甘油，0.01～5％(v/v)tritonX～100，pH 7～9。利用本发明制备蝎毒蛋白，具有操作简单、复性效果好的优点。

主权项

一种蝎毒蛋白的纯化与复性方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将蝎毒蛋白包涵体投入变性缓冲液，搅拌处理，离心，收集沉淀，得到变性的蝎毒蛋白；所述的变性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/L Tris，1～10mol/L Gdn‑HCl，20～100mmol/L DTT，pH 7～9，溶剂为水；(2)纯化变性的蝎毒蛋白；(3)用复性缓冲液溶解变性的蝎毒蛋白，复性处理，得到复性的蝎毒蛋白，所述的复性缓冲液，其组成如下：50～200mmol/L Na₂HPO₄，10～100mmol/L Tris，0.1～1mol/L L‑Arg，1～5mmol/L EDTA，0.1～5mmol/L GSH，0.05～0.5mmol/L GSSG，5～20％v/v甘油，0.01～5％v/v tritonX～100，pH 7～9，溶剂为水。