一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法

摘要

本发明要解决的技术问题是提供一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法，涉及一种利用环介导扩增（LAMP）技术进行菌样的快速检测的试剂及方法。试剂组成：10*反应缓冲液^※1、dNTP Mixture:10mM each、甜菜碱：5mol/L、MgSO4：150mmol/L、Bst酶：8000U/mL、染料:钙黄绿素4mmol/L、阴性对照：去离子水、FIP引物（20μmol/L）、BIP引物（20μmol/L）、F3引物（8μmol/L）、B3引物（8μmol/L）和阳性对照DNA^※2。本发明提供多LAMPPCR扩增检测副溶血弧菌基因引物、反应体系、PCR反应参数、检验结果的判断等。本发明所建立的多重降落PCR可克服常规培养的耗时长、灵敏度低等问题，具有快速、简便、特异、灵敏度高等特征。

主权项

本发明一种副溶血弧菌快速检测试剂及检测方法，其特征在于试剂的主要组分：（1）10*反应缓冲液^※1（2）dNTP Mixture:10mM each（3）甜菜碱：5mol/L（4）MgSO₄：150mmol/L（5）Bst酶：8000 U/mL（6）染料：钙黄绿素4 mmol/L（7）阴性对照：去离子水（8）FIP引物（20 μmol/L）     BIP引物（20 μmol/L）     F3引物（8 μmol/L）B3引物（8 μmol/L）（9）阳性对照DNA^※2※1：组成Tris‑HCl （PH 8.8）                 200 mMKCl                                        100 mM(NH₄)₂SO₄                                             100 mMMgSO₄                                                    20 mMTriton X‑100                       1%※2：阳性对照DNA，是用两条外引物扩增出副溶血弧菌tlh基因后，取其片段（243bp）重组入质粒所得。