表达系统

摘要

本文提供与毒素的周质表达相关的组合物和方法，所述毒素包括白喉毒素或CRM197。

主权项

一种用于周质表达CRM197细菌毒素的方法，所述方法是通过：A. 培养大肠杆菌宿主细胞的培养物，所述宿主细胞包含含有3’序列和5’序列的多核苷酸，所述3’序列编码CRM197细菌毒素，所述5’序列编码能够指导所述细菌毒素的周质转运的信号多肽；和B. 诱导所述多核苷酸表达使得周质表达所述CRM197细菌毒素；其中在表达期间进行一种或多种下述步骤：i. 步骤A的pH低于步骤B的pH，其中步骤A中的pH在6.0‑7.0的范围内，步骤B中的pH在6.5‑10.0的范围内；ii. 步骤A的温度高于步骤B的温度，其中步骤A在20‑40℃的温度下进行，步骤B在20‑28℃的温度下进行；或iii. 步骤A的基质补料速度高于步骤B的基质补料速度，其中步骤B的基质补料速度维持在步骤A的基质补料速度的20%‑80%之间；其中所述方法在发酵罐中进行，并且所述信号肽是SEQ ID NO: 24。