一种¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台及其操作方法

摘要

本发明涉及一种¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台及其操作方法。¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台是一种集蛋白质在线酶解，¹⁸O在线标记，多肽分离、检测于一体的系统，包括：注射泵，进样针，柱温箱，酶反应器，切换阀，肽段捕集柱，液相色谱泵，多肽分离柱以及质谱检测器。蛋白样品首先通过注射泵上样到酶反应器中进行孵育，在酶解的同时进行¹⁸O标记，酶解完成后¹⁸O标记的肽段经捕集柱在线富集后，转入多肽分离柱进行进一步的分离，最后通过质谱检测器进行检测。本发明的优点是将蛋白酶解、¹⁸O标记、多肽分离集成化。

主权项

一种¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台，其特征在于：¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台的构建：进样针(2)与注射泵(1)传动连接，由注射泵(1)驱动进样针(2)向酶反应器(4)内进样；酶反应器(4)置于一柱温箱(3)内，酶反应器(4)的样口入口与进样针(2)相连，酶反应器(4)的样口出口接第一四通或六通阀(5)的第一接口；二台液相色谱泵(9)的物料入口分别与两个流动相储罐相连，二台液相色谱泵(9)的物料出口分别与一个混合器的入口相连，混合器的出口接第一四通或六通阀(5)的第二接口；肽段捕集柱(6)入口端与三通的第一接口相连，三通的第二接口与第一四通或六通阀(5)的第三接口相连，三通的第三接口与第二四通或六通阀(8)的第一接口相连；第一四通或六通阀(5)的第四接口接废液收集容器；肽段捕集柱(6)的出口端与四通的第一接口相连，四通的第二接口与第二四通或六通阀(8)的第二接口相连，第二四通或六通阀(8)的第三接口和第四接口接废液收集容器；四通的第三接口接高压加电金属针；四通的第四接口与多肽分离柱(7)的入口端相连，多肽分离柱(7)的出口端与质谱检测器(10)的进样口相连；所述¹⁸O在线标记的蛋白质定量分析平台将蛋白酶解部件、¹⁸O在线标记、多肽分离部件、检测器集成化；酶反应器是实现¹⁸O在线标记的关键部件，能够在酶解的同时对酶解后的肽段进行高效的¹⁸O标记；制备酶反应器的材料为有机基质的整体材料或有机‑无机杂化的整体材料或有机基质的颗粒材料；制备酶反应器所固载的酶的种类为：丝氨酸蛋白酶。