一种制备螺旋霉素碱产生菌生二素灰色链霉菌孢子的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种制备螺旋霉素碱产生菌生二素灰色链霉菌孢子的方法。该方法中平板培养基的制备为：采用玉米淀粉4%、淀粉酶0.03%、黄豆饼粉1%、氯化钠0.4%、七水硫酸镁0.05%、碳酸钙0.5%、琼脂1%、余量为蒸馏水的比例配制平板培养基，将平板培养基经过灭菌倒入培养皿中。本发明新的制备方法可以产生孢子，获得的孢子斜面可制作牛奶管进行菌种保藏，一般至少可保存6年。

主权项

一种制备螺旋霉素碱产生菌生二素灰色链霉菌孢子的方法，其特征在于，包括以下步骤：a．平板培养基的制备：采用玉米淀粉4±0.54%、淀粉酶0.03±0.005%、黄豆饼粉1±0.05%、氯化钠0.4±0.05%、七水硫酸镁0.05±0.005%、碳酸钙0.5±0.05%、琼脂1±0.5%、余量为蒸馏水的比例配制平板培养基，将平板培养基经过灭菌倒入培养皿中；b．菌悬液的制备：取预先选定的装有菌丝体的优质冷冻管作为出发菌株，接种到种子摇瓶中，在摇床上培养40~48小时，在无菌条件下，吸取种子液放到装有玻璃珠的三角瓶中，手振荡5~10分钟，然后过滤于另一三角瓶即成菌悬液；c．单菌落孢子的培养：将菌悬液按10倍的浓度梯度稀释至10^‑2、10^‑3、10^‑4，将三个浓度的菌悬液分别加入到步骤a得到的不同培养皿的平板培养基上，在温度为27±0.5℃、湿度为40%~50%条件下培养18~20天；d．斜面培养基的制备：采用玉米淀粉4%、淀粉酶0.03%、黄豆饼粉1%、氯化钠0.4%、七水硫酸镁0.05%、碳酸钙0.5%、琼脂1%、余量为蒸馏水的比例配制斜面培养基，将斜面培养基分装到试管中，经灭菌后摆斜面；e．单菌落孢子斜面的制备：选择步骤c制得的规则、丰满的单菌落孢子，用灭过菌的接种铲轻轻刮下孢子，均匀涂在步骤d得到的空白斜面上，每个单菌落只传一支斜面，传好后塞紧棉塞用无菌滤纸包扎，在温度为27±0.5℃、湿度为40%~50%条件下培养18~20天；f．摇瓶初筛和摇瓶复筛：取培养成熟的步骤e中的孢子斜面试管，进行单菌落孢子的摇瓶初筛和摇瓶复筛，选出生产能力强的单菌落孢子斜面；g．孢子斜面保藏。