主权项 |
鉴定与XYL‑IV编码核酸同源的核酸的方法,包括:在高严紧条件下将与(a)编码SEQ ID NO:1中的cDNA所编码的相同成熟多肽的DNA分子,或者(b)(a)的DNA分子的互补分子有100%序列同一性的DNA与测试核酸杂交;筛选与(a)或(b)杂交的测试核酸;分离杂交的测试核酸,其中,所述的高严紧条件为:(1)对于洗涤使用低离子强度和高温度,50℃下0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1%十二烷基硫酸钠;(2)杂交期间使用变性剂,用42℃下,含有0.1%牛血清白蛋白/0.1%Ficoll/0.1%聚乙烯吡咯烷酮/50mM磷酸钠缓冲液,pH 6.5和750mM氯化钠,75mM柠檬酸钠的50%(v/v)甲酰胺;或者(3)42℃下,使用50%甲酰胺,5x SSC:即0.75M NaCl和0.075M柠檬酸钠;50mM磷酸钠,pH 6.8;0.1%焦磷酸钠,5x Denhardt's溶液,超声处理的0μg/ml的鲑精DNA,0.1%SDS,和10%硫酸葡聚糖,在42℃下用0.2x SSC:即氯化钠/柠檬酸钠,和在55℃下用50%甲酰胺洗涤,接着55℃下用含有EDTA的0.1x SSC组成的洗液高严紧性洗涤。 |