一种血浆中游离的目标DNA低频突变富集测序方法

摘要

本发明提供了一种血浆中游离的目标DNA低频突变富集测序方法，包括血浆DNA提取与文库构建、通用文库TT COLD PCR扩增富集、探针富集捕获、捕获产物PCR及上机测序、正反双链纠错低频信息分析，具体为基于通用引物进行TT COLD PCR对所有类型变异实现第一级突变富集扩增；设计富集探针芯片，针对热点变异将人基因组参考序列hg19设计的探针替换为基于突变碱基设计的探针，其他位点探针不变，进行第二级富集捕获；基于文库构建中的插入DNA两端12bp自身序列作为标签进行正反双链纠错比对，提高数据利用率，实现低频精确检测。本发明方法操作简便，实用性强，可以对0.01％低频变异具有高特异性检测。

主权项

一种血浆中游离的目标DNA低频突变富集测序方法，包括以下步骤：(1)血浆中游离的目标DNA的提取与文库构建；(2)通用文库TT‑COLD PCR扩增富集；(3)探针富集捕获、杂交捕获产物的扩增与上机测序；(4)正反双链纠错低频信息分析。