水中浮游生活微型异养鞭毛虫的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种水中浮游生活微型异养鞭毛虫的分离纯化方法，主要包括自制微量吸管、鞭毛虫样品的采集、鞭毛虫单体的分离和鞭毛虫单体的纯化等步骤。应用本发明从水体中分离纯化微型异养鞭毛虫，由于是在一个微液滴中确认鞭毛虫数量，所以辨认过程比较简单，通常鞭毛虫的形态表现为一个移动速度很快的小圆点，而本法的部分操作不需要在显微镜视野中进行，大大减少了折断毛细管的情况。同时，本发明的方法简便易学、分离速度快，为微型异养鞭毛虫的研究提供了有效可靠的技术支持。

主权项

一种水中浮游生活微型异养鞭毛虫的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)自制微量吸管将长嘴吸管的嘴部放在酒精灯上加热，待玻璃变红，迅速将吸管的末端受热位置均匀拉细成毛细管，即得微量吸管；(2)鞭毛虫样品的采集用广口瓶、大口三角烧瓶野外采集异养鞭毛虫水样，采集后用纱布包裹瓶口，带回实验室进行加富培养；(3)鞭毛虫单体的分离取少量的加富培养后的水样滴加适量在玻片一侧；在显微镜(100×)下，从玻片的另一侧找到一片空白区域并在镜头下确认该区域的位置；用自制微量吸管从水样中吸取微量液体小心滴在镜头下既定区域；立即在显微镜视野中找到该液滴，反复调节焦距，直至确认液滴中的鞭毛虫数量；如果液滴中只有一个鞭毛虫，那么迅速将微量吸管靠近液滴，利用吸管的毛细作用重新吸回液滴，然后将液滴转移到预先准备好的菌液中；如果液滴中有多个不同的鞭毛虫，则放弃该液滴，重复吸取液滴观察操作；(4)鞭毛虫单体的纯化将挑好的鞭毛虫个体放在20～25℃下培养，约3～4天后取样，在400倍和1000倍显微镜视野下观察，确认是否成功分离出纯种；如果分出的鞭毛虫不纯，可以进行第二次分离，直到分离到纯化种类为止。