一种重组人促卵泡激素的纯化方法

摘要

本发明涉及利用重组DNA技术生产基因工程药物，属于生物技术领域，具体涉及一种重组人促卵泡激素的纯化方法，即将含有重组人促卵泡激素的细胞上清依次经过染料亲和层析、疏水作用层析、脱盐层析和羟基磷灰石层析得到高质量的重组人促卵泡激素目的蛋白。本发明具有工艺简单、成本低、目的产物纯度高以及中间过程便于控制和易于规模化放大生产等特点。

主权项

一种重组人促卵泡激素的纯化方法，其特征在于：其具体步骤为：染料亲和层析(1)用平衡缓冲液对染料亲和层析柱进行平衡，将含重组人促卵泡激素目的蛋白的细胞培养上清进行上样，重组人促卵泡激素目的蛋白吸附于染料亲和层析介质上；(2)用含有NaCl的平衡缓冲液对步骤(1)处理的层析柱进行洗脱，使重组人促卵泡激素目的蛋白穿出染料亲和层析柱，收集洗脱蛋白液；疏水作用层析(3)用含盐的平衡缓冲液对疏水层析柱进行平衡，将步骤(2)中的洗脱蛋白液进行上样，使重组人促卵泡激素目的蛋白穿出疏水层析柱，收集穿出蛋白液；脱盐层析(4)将步骤(3)中的穿出蛋白液上样到用平衡缓冲液平衡好的脱盐柱上进行脱盐，收集脱盐的蛋白液；羟基磷灰石层析(5)用平衡缓冲液对羟基磷灰石层析柱进行平衡，将步骤(4)中收集的蛋白液上样到羟基磷灰石层析柱上，重组人促卵泡激素目的蛋白穿出并收集，即获得目的蛋白原液；其中，染料亲和层析的介质选用Blue Sepharose CL‑6B或Blue Sepharose 6Fast Flow或Blue Sepharose High Performance；步骤(1)‑(5)中所用的平衡缓冲液为Tris‑HCl缓冲液或磷酸盐缓冲液或Hepes缓冲液，缓冲液浓度为10mmol/L‑100mmol/L，pH值为6.5‑10.0。