一种食用真菌的单孢杂交方法

摘要

一种食用真菌的单孢杂交方法，包括以下步骤：(1)亲本单核菌丝体的预备；(2)YMG液体专用培养基的制备、分装及灭菌；(3)液体培养下配对交配；(4)镜检确认双核化菌丝。本发明具有操作简单、交配时间短、省工省力、准确性高的特点，从而提高杂交育种工作效率。

主权项

一种食用真菌的单孢杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)亲本单核菌丝体的预备：分别从食用真菌亲本的子实体中收集孢子，用无菌水制成孢子为0.5～1.5×10^‑6的悬浮液，均匀涂布于PDA培养基上，23～25℃下培养3～4天，挑取连带基质的星芒状细小菌落移植到PDA培养基上再培养，再挑取其菌丝于显微镜下检查无锁状联合，而且出菇试验验证不出菇，即获得了其单核菌丝，培养单核菌丝菌落至7mm以上，备用；(2)YMG液体专用培养基的制备、分装及灭菌：分别称取酵母膏3.8～4g、麦芽浸膏4.8～5g、葡萄糖18～20g、磷酸二氢钾0.8～1g、硫酸镁0.3～0.5g，混合添加于自来水中，适当加热使其溶解，最后用水定容至1000ml，得到YMG液体专用培养基；然后分装至2.6cm×20.2cm玻璃试管中，装液量25～30ml/支，灭菌，冷却；(3)液体培养下配对交配：在无菌操作下，采用打孔器(打孔直径7mm)打取供亲本菌株的两单核菌丝菌种块，两接种块紧密挨着接入试管培养基中，置放于摇床内，在23～25℃、转速100～200r/min条件下振荡培养4～5d；(4)镜检确认双核化菌丝：在无菌操作下，将成团种块移植于PDA平板培养基上培养3～4天，然后在菌落边缘处直接挑取新萌发出的菌丝，镜检具有锁状联合的双核菌丝，即成功获得了单孢杂交的新菌株。