一种百日咳诊断试剂盒及制备方法

摘要

本发明公开了一种百日咳诊断试剂盒及制备方法，该试剂盒包括纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针、百日咳杆菌荚膜抗原、斑点金免疫集中渗滤装置。所述的集中渗滤装置由塑料小盒、点加了纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针的硝酸纤维素膜和吸水层三部分组成，吸水垫放置于盒的凹槽处，硝酸纤维素膜放在吸水垫与盒盖之间，吸水层是由3-5层吸水垫叠放在一起组成的。本发明试剂盒在纳米金放大技术的基础上，通过集中渗滤装置将抗原抗体反应产生的免疫金斑点再次集中放大，提高检测灵敏度，以扩大检测限，从患病的潜伏期、痉挛期直到恢复期均可有进行效检测。

主权项

一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于包括纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针、百日咳杆菌荚膜抗原、斑点金免疫集中渗滤装置，所述的集中渗滤装置由塑料小盒、点加了百日咳杆菌荚膜抗原的硝酸纤维素膜和吸水垫三部分组成；所述的纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针的浓度为0.92‑1.86μg/mL；所述的百日咳杆菌荚膜抗原浓度为0.85～1.65μg/mL；所述的点加了百日咳杆菌荚膜抗原的硝酸纤维素膜采用如下方法制备得到：(1)细菌分离培养：用马铃薯血液甘油琼脂培养基培养百日咳杆菌，5‑7日后，停止培养，分离菌落；(2)溶菌酶处理细菌悬液：在细菌细胞的悬液中加溶菌酶，27‑35℃，保温15min，破碎细菌细胞；(3)抗原提取：用氢作为溶剂，0.03‑0.05mol/L的磷酸盐作为缓冲液，进行提取，温度控制在5℃以下，pH控制在5.0‑7.0；(4)抗原分离与纯化：用离子交换法进行分离，其中，所述交换剂为DEAE‑葡聚糖凝胶或CM‑葡聚糖凝胶；(5)抗原浓缩：采用冰冻法进行浓缩，先将步骤(4)制备的抗原冷却成固体，然后再缓慢溶解，不含抗原的纯冰晶浮于液面，抗原则集中于下层溶液中，移去上层冰块，再次用稀释液调节浓度至0.85～1.65μg/mL，即得抗原浓缩液，‑20～‑4℃保存；(6)抗原包被硝酸纤维素膜：将硝酸纤维素膜上放入调节好浓度的百日咳杆菌荚膜抗原溶液中，静置20‑30min，待硝酸纤维素膜充分吸附百日咳杆菌荚膜抗原，取出，低温保存备用。