一种好氧反硝化枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法

摘要

本发明公开了一种好氧反硝化枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法。本发明是利用现代生物发酵技术，进行液体-固体联合发酵，通过液体高密度发酵，固体发酵，过程补料、低温烘干等易于工业化生产的生产工艺，培养生产芽孢数含量高的高活性降解亚硝态氮的好氧反硝化枯草芽孢杆菌制剂；其每克微生物制剂含活菌数200～250亿个，芽孢率>80％，杂菌率0.5％～1％。本发明制剂用作养殖水体改良剂，能有效降低养殖水体亚硝酸盐含量，改善水质，保障水产养殖业的健康可持续发展需要。

主权项

一种好氧反硝化枯草芽孢杆菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将浓度为2.0×10⁸cfu/mL～2.0×10⁹cfu/mL的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)GIM1.7152种子培养液以3％～5％体积比的接种量转接到含有一级发酵培养基的发酵罐中，发酵温度37±1℃，搅拌速率200～350rpm，通气量0.8～0.9V/V·min，溶氧浓度80～90％，使枯草芽孢杆菌GIM1.7152生长至对数生长期，制成一级种子液；(2)将一级种子液以2％～10％体积比的接种量转接到含有二级发酵培养基的发酵罐中，发酵温度37±1℃，搅拌速率150～250rpm，通气量0.8～0.9V/V·min，溶氧浓度80～90％，使枯草芽孢杆菌GIM1.7152生长至对数生长期，制成二级种子液；(3)将二级种子液以20～40ml/Kg麸皮固体培养基的接种量接入麸皮固体培养基中，混合均匀，控制通风量为：换气3～10次/h，温度30～40℃，湿度80％～90％条件下培养48～72h，培养期间翻动麸皮固体培养基，由此制备得到好氧反硝化枯草芽孢杆菌制剂；所述的一级和二级发酵培养基都为：每升含有MgSO₄ 0.5～2.0g、KH₂PO₄ 1～5g、K₂HPO₄ 1～5g、NaCl 5～10g、KNO₃ 1‑10g、蛋白胨5～20g、牛肉膏3～15g和余量的水，pH7.2±0.3；所述的麸皮固体培养基为：按质量分数100％计，包含麸皮48％～60％、硫酸铵0.1％～0.5％、氯化铵0.1％～0.5％、硝酸钠0.1～1.0％和余量的水。