一种利用蛋白IHF构建克隆载体的方法

摘要

本发明公开了一种利用蛋白IHF构建克隆载体的方法，通过对待连接的DNA片段设计引物，并引入DNA同源同组序列，在分别进行扩增，扩增产物和IHF混合，利用传统的转化方法在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。本发明方法不依赖于任何重组酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，用同源重组的方法和IHF蛋白一起完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体同源重组连接，常温反应时间短至10分钟，阳性率高达95％以上。

主权项

一种利用蛋白IHF构建克隆载体的方法，其特征在于：包括以下步骤：1)设计引物：对至少两个待连接的DNA片段设计引物；2)根据酶切或者PCR反应得到待连接的线性化载体；3)对至少两个待连接的DNA片段之间引入DNA同源同组序列；4)利用IHF蛋白进行同源重组转化；5)在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。