溶栓酶基因QK-02的表达方法及专用表达载体和工程菌

摘要

本发明公开了一种溶栓酶基因QK-02的专用表达载体，该载体由pET40b表达载体和溶栓酶基因经过Sal I/EcoR I酶切后重组而成。本发明还提供了一种用于表达枯草杆菌溶栓酶的工程菌，是将上述载体导入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中得到的重组菌。本发明还提供了一种溶栓酶基因QK-02的表达方法，是发酵上述工程菌经诱导后，再对发酵产物通过肠激酶酶切及镍柱的分离纯化得到qk-02。本发明的重组酶具有高活性，抗氧化，无致病性，高分泌特性的优点，可以直接将功能性胞外蛋白酶分泌到细胞周质中，大大增加了融合蛋白的可溶性，提高了蛋白的活性，避免了包涵体溶解及复性带来的麻烦，成本低。因此，该酶在心血管疾病治病中有重要的应用价值。

主权项

一种溶栓酶基因QK‑02的专用表达载体，所述载体在细胞周质中高水平表达重组蛋白，引导重组蛋白分泌到培养基中，其特征在于：所述载体由pET40b表达载体和溶栓酶基因经过Sal I/EcoR I酶切后重组而成；所述载体基于T7启动子通过添加lac操纵子改造成为IPTG诱导的启动子；所述载体具有His标签、肠激酶酶切位点，具有卡那霉素抗性，表达出DsbC(二硫键异构酶)融合蛋白。