一种SD大鼠颈总动脉内皮细胞的分离和培养方法

摘要

本发明公开一种SD大鼠颈总动脉内皮细胞的分离和培养方法，包括以下步骤：1）在无菌条件下切取SD大鼠的颈总动脉；2）将颈总动脉切割成段后放入PBS溶液中，剥除外膜，并将颈总动脉沿纵向切割，把内膜向下平摊于装有消化酶溶液的容器内，使颈总动脉的内膜与容器中的消化酶溶液充分接触；3）振动容器，使内皮细胞脱落，消化结束后除去颈总动脉，向容器中加入胎牛血清，搅拌均匀后制得混合液；4）将混合液离心，除去上清液后得到颈总动脉内皮细胞，将颈总动脉内皮细胞放入内皮细胞培养基中进行培养，达到对数期后转入培养箱中培养，之后进行传代培养。本发明不仅成活率高、对细胞损害低，且经济实用、简单易行，适于工厂等大规模生产。

主权项

一种SD大鼠颈总动脉内皮细胞的分离和培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1）选取重为100‑150g的SD大鼠，在无菌条件下切取SD大鼠的颈总动脉并除去血污，备用；2）将颈总动脉切割成长为3‑5cm的长段后放入PBS溶液中，剥除颈总动脉的外膜，并将颈总动脉沿纵向切割，把颈总动脉的内膜向下平摊于装有消化酶溶液的容器内，使颈总动脉的内膜与容器中的消化酶溶液充分接触，实现颈总动脉内膜的消化，所述消化酶溶液由质量浓度为0.2%的Ⅰ型胶原酶和质量浓度为0.125%的胰酶按1:1的体积比混合并搅拌均匀后制得；3）在颈总动脉内膜消化的过程中振动容器，使内皮细胞脱落，消化结束后除去颈总动脉，向容器中加入胎牛血清，且胎牛血清与容器中液体的体积比为1‑2:2，搅拌均匀后制得混合液；4）将混合液放入转速为1500r/min的离心机中离心3min，除去上清液后得到颈总动脉内皮细胞，将颈总动脉内皮细胞放入内皮细胞培养基中进行培养，达到对数期后转入温度为37℃、CO₂体积浓度为5%的CO₂ 培养箱中培养，之后进行传代培养即可。