发明名称 |
一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法 |
摘要 |
本发明涉及一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法,包括:取尿样,在恒温水浴中酶解,本胆烷醇酮葡萄糖醛酸甙经酶解后生成本胆烷醇酮,提取本胆烷醇酮,测定其碳元素同位素比,得δ<sub>1</sub>值,将提取到的本胆烷醇酮经化学方法处理后,得到A-nor-5β-androstane-2,17-dione,测定A-nor-5β-androstane-2,17-dione的碳元素同位素比,得δ<sub>2</sub>值,考察两个化合物的碳元素同位素比值,如果δ<sub>1</sub>-δ<sub>2</sub>的差值大于2.8‰,则表明尿样来源于服用新型睾酮兴奋剂的尿样。本方法用于体育领域新型睾酮兴奋剂的检测,检测灵敏,准确性高。 |
申请公布号 |
CN105021734A |
申请公布日期 |
2015.11.04 |
申请号 |
CN201510447119.8 |
申请日期 |
2015.07.27 |
申请人 |
王静竹 |
发明人 |
王静竹 |
分类号 |
G01N30/02(2006.01)I |
主分类号 |
G01N30/02(2006.01)I |
代理机构 |
北京轻创知识产权代理有限公司 11212 |
代理人 |
杨立 |
主权项 |
一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法,其特征在于,包括:取尿样6mL,加入1mL pH=7.0的磷酸盐缓冲液和50μLβ‑葡萄糖醛酸甙酶溶液,混匀,在55℃恒温水浴中酶解3小时,取出,加入8mL叔丁基甲醚振荡萃取,离心,吸取上层有机溶液,在65℃加热的情况下用氮气吹干,再用50μL 100%乙腈溶剂溶解,转入样品瓶中,封盖,以HPLC纯化,收集24‑25分钟含有本胆烷醇酮的流出液1mL,取50μL的流出液,在60℃加热的情况下用氮气吹干,采用同位素比质谱仪分析其碳元素同位素比,得本胆烷醇酮的δ<sub>1</sub>值,余下的流出液在60℃加热的情况下用氮气吹干,得本胆烷醇酮;取上述制备的本胆烷醇酮,加入4μL冰醋酸及16μL氧化剂,在68℃保持1小时,再升温至90℃保持1小时,得反应液,反应液用50μL CH<sub>2</sub>Cl<sub>2</sub>提取两次,合并提取液,提取液用氮气吹干后,加入20mg无水碳酸钠及10μL醋酐,在120℃保持2.5小时后,用氮气吹干,再加入超纯水分散残渣,用50μL CH<sub>2</sub>Cl<sub>2</sub>提取,有机层在60℃加热的情况下用氮气吹干,得到A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione,采用同位素比质谱仪分析其碳元素同位素比,得A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione的δ<sub>2</sub>值;考察本胆烷醇酮的δ<sub>1</sub>值与A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione的δ<sub>2</sub>值,如δ<sub>1</sub>‑δ<sub>2</sub>的差值大于2.8‰,则表明尿样为使用新型睾酮兴奋剂的尿样。 |
地址 |
100029 北京市朝阳区安定路1号奥体中心兴奋剂检测实验室 |