负载羊膜固有干细胞的冻存活性羊膜微粒及其条件培养基与应用

摘要

本发明涉及组织工程和医学创面修复技术领域，具体涉及负载羊膜固有干细胞的冻存活性羊膜微粒及其条件培养基与应用。本发明将废弃新鲜羊膜制备成微粒，采用无血清干细胞冻存液冻存在液氮中，在保留羊膜完整基质成份的同时，长期保留羊膜上皮细胞活性，而且可有效避免疾病传播。通过其收集制备的条件培养基能明显促进人表皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞的趋化、迁移，动物移植发现活性羊膜微粒可通过调节炎症反应、促进血管化、加快上皮化等多条途径来改善创面愈合，而且羊膜基质可直接作为真皮替代物诱导真皮再生，显著改善创面愈合质量。本发明制备的负载羊膜固有干细胞的冻存活性羊膜微粒及其条件培养基可为创面修复提供一种简单有效的方法。

主权项

一种负载羊膜固有干细胞的冻存活性羊膜微粒，其特征在于，所述的羊膜微粒的构建方法包括以下步骤：A、羊膜的获取选择肝炎病毒抗体、梅毒抗体及HIV均为阴性的剖腹产妇的新鲜胎盘组织，在无菌条件下钝性分离绒毛膜，剥离去除纤维母细胞层和海绵层，经含100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、0.25μg/ml两性霉素的PBS浸泡冲洗3×15min，将羊膜切割成长为4‑10cm宽为2‑8cm的片状羊膜；B、活性羊膜微粒的制备、冻存将步骤A制备的片状羊膜制备成300‑600μm大小的羊膜微粒，1000rpm离心十分钟，去除上清，加入无血清干细胞冻存液；将浸泡在无血清干细胞冻存液中的羊膜微粒放入冷冻管中，将冷冻管放置于液氮中保存。