一种沙眼衣原体的荧光定量PCR检测试剂盒

摘要

本发明提供了一种适用于临床样本中沙眼衣原体的荧光定量PCR检测试剂盒，用于沙眼衣原体的辅助诊断。该试剂盒包含：PCR反应液、DNA聚合酶液、阳性质控品、弱阳性质控品、阴性质控品、阳性定量参比品、裂解液及蛋白酶K；PCR反应液包含正反向引物和荧光探针，上述引物和探针为针对沙眼衣原体特异序列设计特异性引物，能特异性扩增靶DNA序列，可以简便快速的检测临床样本中沙眼衣原体感染，具有特异性高、灵敏度高的特点。

主权项

一种沙眼衣原体的荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包含PCR反应液、DNA聚合酶液、阴性质控品、阳性质控品、弱阳性质控品、阳性定量参比品、裂解液及蛋白酶K溶液，所述PCR反应液中包含有沙眼衣原体特异性的正向引物、反向引物和荧光探针；正向引物序列：5'‑GCATGAGTCAGGACGAGTT‑3'，反向引物序列：5'‑CGAAACTAAATGTGCGAGAGC‑3'，荧光探针序列：5'‑FAM‑TTAGCCACCGATGAAGACCCGTTAC‑TAMRA‑3'，所述裂解液为5.0mM NaOH、10.0mM Tris‑HCl（pH8.0）、0.2mM EDTA(pH8.0)、1%(V/V)TritonX‑100、0.5%(V/V) NP40、0.5%(V/V)Tween20；所述DNA聚合酶液为包含有热启动的Taq DNA 聚合酶和UDG酶；所述阳性质控品与弱阳性质控品为含插入沙眼衣原体特异性保守序列的质粒pCR2.1载体，该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中增殖后经提取纯化用分光光度计测定浓度和纯度后用无菌TE缓冲液定量稀释，其中CT阳性质控品的浓度为5.0×10⁷copies/ml，CT弱阳性质控品的浓度为5.0×10³copies/ml；所述CT阳性定量参比品为含插入沙眼衣原体特异性保守序列的质粒pCR2.1载体，浓度分别为P1：5.0×10⁶copies/ml，P2：5.0×10⁵copies/ml，P3：5.0×10⁴copies/ml，P4：5.0×10³copies/ml；所述阴性质控品为灭菌去离子水。