定量检测microRNA的PCR分析方法

摘要

本发明公开了一种基于碱基堆积杂交原理的定量检测microRNA的PCR分析方法，包括以下步骤：利用靶标microRNA与DNA扩增模板结合后，通过碱基堆积杂交作用稳定了正向引物与DNA扩增模板的结合，在DNA聚合酶作用下延伸正向引物，在与反向引物共同作用下，引发PCR反应，得到双链DNA，染料SYBR Green I与双链DNA结合产生荧光信号，实时测定反应体系中的荧光信号强度，与标准工作曲线对比，计算出靶标microRNA的浓度。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、成本低等特点，可广泛应用于组织，血液或细胞的生物样本中microRNA检测。

主权项

一种定量检测microRNA的PCR分析方法，其特征在于，包括以下步骤：利用靶标microRNA与DNA扩增模板结合后，通过碱基堆积杂交作用稳定了正向引物与DNA扩增模板的结合，在DNA聚合酶作用下延伸正向引物，在与反向引物共同作用下，引发PCR反应，得到双链DNA，染料SYBR Green I与双链DNA结合产生荧光信号，实时测定反应体系中的荧光信号强度，与标准工作曲线对比，计算出靶标microRNA的浓度；所述的PCR分析方法不是用于疾病的诊断和治疗方法；所述正向引物序列为5′‑ATGCGACGATGCGA‑3′；所述反向引物序列为5′‑GGCTAAGACAGATGCTC‑3′；所述靶标microRNA为let‑7a、miR‑141、miR‑21、miR‑200b。