一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法

摘要

本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法。本发明利用一锅法合成包有长链聚乙二醇的磁球Fe₃O₄@PEG，再在PEG的末端羟基上接上三氟乙磺酰基或者将其氧化为醛基。这些活性基团稀疏地分布在磁性材料的表面，与膜蛋白上不同位点的游离氨基发生高效反应，从而将膜蛋白牢固地键合到材料表面。因此，膜蛋白的增溶剂以及磷脂等干扰物便可通过洗涤以及磁性分离的方法被轻松除去，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用该磁性材料固定膜蛋白具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到膜蛋白组的鉴定上。本发明新颖便捷，实用高效，重复性好，稳定性高，具有巨大的推广应用潜力。

主权项

一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法，其特征在于具体步骤如下：（1）磁性材料的合成： 把二茂铁和PEG‑20000按照1:6‑1:5的质量比均匀溶解在丙酮中；按体积浓度为2%‑4%（v/v）逐滴加入质量浓度为30%的过氧化氢，然后转移到不锈钢反应釜中200‑230°C 反应24‑48 h，得到Fe₃O₄@PEG；分别用丙酮和乙醇洗涤以去除多余的原料和未包裹的Fe₃O₄；（2）将合成好的 Fe₃O₄@PEG分散在二氯甲烷与吡啶中，50 mg Fe₃O₄@PEG 模板材料中逐滴加入100‑200 μL三氟乙磺酰氯，在室温下氮气氛围中不断搅拌18‑24 h，制得Fe₃O₄@PEG‑Tresyl材料；或者将Fe₃O₄@PEG分散在醋酐与二甲基亚枫的混合液中，在室温下氩气氛围中30‑36 h，制得Fe₃O₄@PEG‑Formyl 材料；（3）磁性材料共价固定膜蛋白并除去表面活性剂：使用pH为 7.0‑9.0的4%（w/v） SDS溶液提取膜蛋白；将膜蛋白通过共价键合反应固定在步骤（1）制得的Fe₃O₄@PEG‑Tresyl 或者Fe₃O₄@PEG‑Formyl 材料表面上；然后通过水洗或磁性分离的方法，去除高浓度的SDS以及其他干扰物。