快速分离铜绿假单胞菌的方法

摘要

本发明公开了富集分离铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的方法，更好地为目的菌进行后续研究提供基础，涉及生物技术领域。方法包括树状分子与抗体共价偶联、抗体修饰的树状分子再包被长链生物素分子、抗体和长链生物素共修饰的树状分子捕获样品液中的目的菌、链霉亲和素修饰的纳米磁珠识别并偶联样品液中的长链生物素化树状分子、被捕获细菌的分离及重悬等步骤；重悬液可以直接进行后续分析，与传统的细菌磁分离方法相比，该方法更适用于在复杂基质中对细菌进行磁分离，提高了样品中目的菌分离效率。

主权项

快速分离铜绿假单胞菌的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）每取0.55 mg树状分子 PAMAM G4溶解于2 mL 0.02 M，pH 6.5磷酸缓冲液PBS，加入0.6 mg N‑羟基丁二酰亚胺，0.4 mg EDC，室温置于混匀仪上搅拌，活化15 min；加入6 mg 铜绿假单胞菌特异性抗体，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得到树状分子‑抗体复合物；（2）取15 mg 长链生物素，3.6 mg N‑羟基丁二酰亚胺，2.4 mg EDC溶解于2 mL 0.02 M pH 6.5 PBS缓冲液中；加入0.55 mg树状分子‑抗体复合物，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素‑树状分子‑抗体复合物；（3）取1 mL待测样品，加入0.1 mg铜绿假单胞菌抗体和长链生物素共修饰的树状分子即步骤（2）长链生物素‑树状分子‑抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁分离后，去离子水轻轻清洗，用PBS缓冲液重悬即得富集有铜绿假单胞菌的纳米磁珠‑链霉亲和素‑长链生物素‑树状分子‑抗体‑铜绿假单胞菌抗原复合物。