一种陆川猪及其肉制品的DNA分子鉴定方法

摘要

一种陆川猪及其肉制品的DNA分子鉴定方法，其中ISSR-PCR所用的引物为WM14、WM12和WM29，其核苷酸序列分别为：5'-CTCCTCCTCGC-3'、5'-CACCACCACGC-3'和5'-CTCCTCCTCAT-3'。最终绘制了7张陆川猪及其肉制品的电泳图谱，建立了陆川猪及其肉制品的DNA指纹图谱，可作为区分鉴定陆川猪及其肉制品的依据。本发明采用可靠的DNA分子鉴定技术，快速、准确的鉴定了陆川猪、陆川猪杂交品种、巴马香猪、环江香猪及其肉制品之间的区别，促进了陆川猪优势品牌猪的发展。

主权项

一种陆川猪及其肉制品的DNA分子鉴定方法，包括提取生鲜肉及其肉制品的总DNA，利用ISSR‑PCR反应扩增生鲜肉及其肉制品的DNA，构建生鲜肉及其肉制品的DNA电泳图谱以及鉴定陆川猪及其肉制品步骤，其特征在于，所述利用ISSR‑PCR反应扩增生鲜肉及其肉制品的DNA所用的引物为WM14、WM12和WM29，其中核苷酸序列分别为：5'‑CTCCTCCTCGC‑3'；5'‑CACCACCACGC‑3'；5'‑CTCCTCCTCAT‑3'；ISSR‑PCR反应体系及程序为：25μL体系：模版DNA 1μL、引物2μL、2×Taq PCR Master Mix 12.5μL、ddH₂O补足25μL，其中2×Taq PCR Master Mix包含了Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂及稳定剂，浓度为2×，且不含染料；扩增程序：95℃预变性5min，95℃变性30s，36℃退火30s，72℃延伸2min，循环30次，72℃再延伸5min；所述构建生鲜肉及其肉制品的DNA电泳图谱为用1.5％的琼脂糖凝胶，1×TAE缓冲液为介质电泳检测扩增结果，根据电泳图绘制电泳图谱。