北冬虫夏草菌种培养方法

摘要

一种可以代替冬虫夏草入药、能代替天然冬虫夏草药源的北冬虫夏草菌种培养方法。技术方案是包括下列步骤：（1）母种制备；（2）母种转原种和栽培种；（3）悬浮液菌种或／液体菌种的制备；（4）北冬虫夏草菌种的人工栽培。

主权项

北冬虫夏草菌种培养方法，其特征是包括下列步骤：(1)母种制备；(2)母种转原种和栽培种；(3)悬浮液菌种或/液体菌种的制备；和(4)北冬虫夏草菌种的人工栽培；其特征是所述的母种制备包括：①制作培养基；②试管母种制备；③试管母种的扩大培养；④出草试验；和⑤组织分离制作母种；其中所述②试管母种制备包括采用冬虫夏草的组织直接切取虫草菌核内部的一小块菌索，0.2％升汞溶液和0.1％ KNO₃溶液分别表面消毒3 min，无菌水冲洗3～5次，无菌条件下切去外层、避开肠道，切取内部黑色菌索0.4 cm，将菌索分别接种到8个培养基中，在三角瓶中进行1～8倍的扩大培养，然后于生化培养箱中20℃静置培养120 h；以及其中，在培养基中加入占培养基总重量的0.001%重量的吲哚基丙酸，并维持培养基的pH为6.7；所述的母种转原种和栽培种包括：①培养基的配制；和②母种转管扩大；所述的悬浮液菌种制备包括：①培养基配制、②灭菌、和③接种培养；所述的液体菌种制作包括：①液体菌种培养基配方、和②接种培养；所述北冬虫夏草菌种的人工栽培包括：(1)按培养基配方制作培养基，培养基配方选自以下5种中的任一种或多种：①炒大米93％，葡萄糖2％，蛋白胨2％，柠檬酸0.29％，硫酸镁0.2％，蚕蛹粉2.5％，维生素B1 0.01％；②高粱米85％，蚕蛹粉10％，蔗糖1.99％，蛋白胨2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，酵母粉0.8％，另加维生素B1 0.01％；③小米95％，葡萄糖3.49％，酵母膏1.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.2％，另加维生素B1 0.01％；④高粱米45％，玉米渣40％，小米10％，蔗糖2％，蛋白胨2％，酵母粉0.8％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％；⑤大米50％，麦麸25％，玉米粉9.99％，葡萄糖或蔗糖2％、木屑10％，蚕蛹粉2％，尿素0.1％，硫酸镁0.9％，另加维生素B1 0.01％；(2)拌料装瓶；(3)灭菌；(4)接种；(5)培养室培养；(6)后期管理；(7)采收；在所述的母种制备中，制作培养基配方为两种之一：(1)葡萄糖20克、琼脂20克、去皮土豆200克煮汁、水1000毫克，即PDA培养基；(2)燕麦片30克、琼脂20克、水1000毫升；母种制备的试管母种扩大培养基配方为下列三种之一：(1)蛋白胨10克，葡萄糖10克，含脂蚕蛹10克，全脂奶粉10克，磷酸二氢钾15克，琼脂20克，水1000毫升；(2)葡萄糖10克，蛋白胨10克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，生长素5毫升，水1000毫升；(3)去皮土豆200克煮汁，葡萄糖20克或蔗糖40克，磷酸二氢钾1.5克，琼脂20克，维生素B1 10克，增长灵0.5克，水1000毫升；所述母种转原种和栽培种的培养基为葡萄糖20克，琼脂20克，土豆200克煮汁，维生素B1 3片，蛋白胨5克，磷酸二氢钾试剂0.5克；所述悬浮液菌种的培养基为下列之一：(1)磷酸二氢钾3克，食盐3克，维生素B1 5片，葡糖糖15克，硫酸镁0.5克，味精0.2克，黄豆粉15克，水1000毫升；(2)玉米粉12克，酵母粉3克，磷酸二氢钾1克，葡萄糖22克，黄豆粉10克，维生素B1 180‑200毫，硫酸镁0.5克，水1000毫升；(3)葡糖糖35克，蛋白胨25克，磷酸二氢钾1克，食盐2.5克，维生素B1 3片；所述液体菌种制备的培养基为下列之一：(1)蛋白胨12克、酵母粉25克、玉米粉10克、黄豆粉10克、磷酸二氢钾0.5克、硫酸镁0.3克、味精0.1克、葡萄糖20克、食盐0.3克、维生素B1 100毫克、水1000毫升；(2)葡萄糖10克、磷酸二氢钾0.5克、硫酸镁1克、氯化钙1克、氨基酸复合粉5克、去皮土豆250克煮汁、蝉蛹20克、水1000毫升。