| 摘要 |
1. Способ очистки вирусов гриппа из культуры клеток, включающий:(f) осветление вирусного урожая путем фильтрации прямого потока (DFF), по крайней мере, через одну мембрану, которая имеет размер пор от приблизительно 1,2 микрометров до приблизительно 0,45 микрометров;(g) концентрацию путем ультрафильтрации тангенциального потока (UF) и замену буфера путем диафильтрации (DF) после этапа (а) при использовании мембраны, имеющей отсечение молекулярного веса (MWCO) 500 кДа;(h) очистку путем аффинной колоночной хроматография после этапа (b);(i) концентрацию путем UF и/или замену буфера путем DF после этапа (с) при использовании мембраны, имеющей отсечение молекулярного веса (MWCO) 500 кДа; и(j) стерилизацию после этапа (d) путем DFF, по крайней мере, через однумембрану, которая имеет размер пор от приблизительно 0,45 микрометров до приблизительно 0,22 микрометров,где общее извлечение очищенных вирусов составляет, по крайней мере, 30%, и где очищенные вирусы включают менее чем 0,1 нг HCD, и менее чем 0,3 мкг НСР на 7,0±0,5 logБОЕ вируса.2. Способ по п. 1, где сахарозу и фосфатный буфер прибавляют к вирусному урожаю до получения заключительной концентрации, в пределах 10% вариации, 218 мМ сахарозы, 11 мМ фосфатного буфера pH 7,0-7,4, перед этапом (а).3. Способ по п. 1, где буфер обмена на этапе (b) включает, в пределах 10% вариации, 218 мМ сахарозы, 11 мМ фосфатного буфера pH 7,0-7,4.4. Способ по п. 1, 2 или 3, где этапы (а) и (b) объединяют.5. Способ по п. 1, 2 или 3, где этап (b) осуществляют при трансмембранном давлении (ТМР) от приблизительно 10 фунтов на кв. дюйм до приблизительно 20 фунтов на кв. дюйм, а скорость потока составляет от приблизительно 35 литров на метр в час (LMH) до приблизительно 50 LMH.6. Способ по п. 1 |
