观察神经细胞的方法

摘要

本发明提供了一种观察神经细胞方法。该方法包括：将神经细胞以1～3×10⁵个细胞/毫升的浓度接种于聚苯乙烯塑料细胞培养玻片上进行培养，以便得到携带细胞培养物的细胞爬片；以及利用扫描电子显微镜或原子力显微镜的至少之一对所述细胞爬片进行观察。由此，通过利用本发明的方法对神经细胞进行观察，不仅可以在形态上更加清晰的观察到突触可塑性形态，还可以从功能上验证分化成熟的类神经元细胞具有突触分泌和传递的功能。

主权项

一种观察神经细胞突触可塑性的方法，其特征在于，包括：将神经细胞以2×10⁵个细胞/毫升的浓度接种于聚苯乙烯塑料细胞培养玻片上进行培养，以便得到携带细胞培养物的细胞爬片；以及利用扫描电子显微镜或原子力显微镜的至少之一对所述细胞爬片进行观察，其中，利用扫描电子显微镜对所述细胞爬片进行观察依次包括下列步骤：利用生理盐水对所述细胞爬片进行清洗2次，每次3秒～5秒；采用2.5体积％的戊二醛、在4摄氏度下，对所述细胞爬片进行固定处理3小时～5小时；利用蔗糖‑PBS缓冲液对所述细胞爬片进行清洗4次，每次10分钟；利用2.5体积％的锇酸对所述细胞爬片进行后固定；依次利用50体积％、70体积％、90体积％和100体积％的乙醇对所述细胞爬片进行梯度脱水；将所述细胞爬片置于醋酸异戊酯中保持25分钟；采用六甲基二硅胺烷对所述细胞爬片进行干燥处理3分钟；将所述细胞爬片粘于绝缘胶并喷金；以及以1.00k或8.50k的倍数，利用扫描电子显微镜对所述细胞爬片进行观察，利用原子力显微镜对所述细胞爬片进行观察包括：利用生理盐水对所述细胞爬片进行清洗2次，每次3秒～5秒；利用2.5体积％的戊二醛、在4摄氏度下，对所述细胞爬片进行固定处理2小时；利用水对所述细胞爬片冲洗5秒；以100微米或16微米的倍数，利用原子力显微镜对所述细胞爬片进行观察；利用原子力显微镜进行观察的条件为：模式：intermittent contact；Line Rate：0.6赫兹～0.7赫兹；探针参数为探针盒宽：3.5微米～4.5微米、探针长：110微米～140微米、宽：25微米～35微米、共振频率：265千赫兹～303千赫兹、弹性系数：20牛顿/米～80牛顿/米,其中，所述神经细胞为NGF诱导后的PC12细胞，所述NGF诱导后的PC12细胞具有神经元特性。