一种器官保存液中乙酰半胱氨酸有关物质的定量检测方法

摘要

本发明提供一种器官保存液中乙酰半胱氨酸有关物质定量检测方法，其特点是：包括（1）制剂中乙酰半胱氨酸三种有关物质的限度确定；（2）检测方法的方法学验证及制剂中乙酰半胱氨酸有关物质的测定。采用HPLC检测方法，参照制剂中允许活性成分杂质的限度值及本制剂现有工艺，确定三种有关物质的定量限度；从专属性、线性、加样回收率、重复性、耐用性等方面对该检测方法进行方法学验证，证明器官保存液A液原液直接进样检测结果良好。摒弃不适用的自身对照定量法，首次实现了对器官保存液中乙酰半胱氨酸有关物质进行外标法定量测定，有效地控制了器官保存液的质量，有利于指导工艺研究，提高产品安全性。

主权项

一种器官保存液中乙酰半胱氨酸有关物质定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：（1） 检测方法及样品制备检测方法为HPLC检测方法：照《中国药典》2010版附录Ⅲ D的高效液相色谱法测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速：0.8‑1.2 ml/min；流动相：含0.02M庚烷磺酸钠或正戊烷磺酸钠、0.5 %w/v硫酸铵的硫酸铵缓冲液，盐酸溶液调pH值为1.4‑1.5 ，硫酸铵缓冲液与甲醇混合，硫酸铵缓冲液与甲醇的体积比例为88:12；柱温为28‑30℃；检测波长为203‑207 nm；10μl进样；杂质对照储备液的制备：精密称取乙酰半胱氨酸杂质C对照品10mg，用流动相稀释至100ml容量瓶中，摇匀；精密称取乙酰半胱氨酸杂质D对照品10mg，用流动相稀释至100ml容量瓶中，摇匀；精密称取盐酸半胱氨酸对照品14.50 mg，用流动相稀释至50ml容量瓶中，摇匀；精密称取胱氨酸对照品10.07mg，用流动相稀释至50ml容量瓶中，摇匀；乙酰半胱氨酸储备液的制备：精密称取乙酰半胱氨酸对照品16.4mg，用流动相稀释至100ml容量瓶中，摇匀备用；杂质对照溶液的制备：分别精密量取乙酰半胱氨酸杂质C 对照储备液3.00ml，乙酰半胱氨酸杂质D对照储备液2.00ml，半胱氨酸对照储备液各1.00ml置10ml量瓶中，用流动相定容，即得含三种有关物质的对照溶液；系统适用性溶液的制备：分别精密量取乙酰半胱氨酸杂质C 对照储备液3.00ml，乙酰半胱氨酸杂质D对照储备液2.00ml，乙酰半胱氨酸、半胱氨酸与胱氨酸对照储备液各1.00ml置10ml量瓶中，用流动相定容，即得含乙酰半胱氨酸与四种有关物质的系统适用性溶液；供试品溶液的制备：器官保存液A液，取原液直接进样；（2）样品测定依照所述HPLC检测方法，取器官保存液A液原液10μl直接进样，记录色谱图，外标法计算制剂中乙酰半胱氨酸三种有关物质的含量，试验累积数据表明，器官保存液A液中三种有关物质的含量分别为：L‑半胱氨酸含量范围为5‑24 µg/ml，乙酰半胱氨酸杂质C即N,N‑双乙酰胱氨酸的含量范围15‑36 µg/ml，乙酰半胱氨酸杂质D即N,S‑双乙酰半胱氨酸的含量范围为6‑15 µg/ml；上述杂质对照储备液的制备时，胱氨酸对照品用流动相稀释至50ml容量瓶之前，先用1ml的0.1M HCL或NaOH溶解，再定容；所述检测方法用于器官保存液中乙酰半胱氨酸有关物质检测时，为L‑半胱氨酸，乙酰半胱氨酸杂质C即N,N‑双乙酰胱氨酸，乙酰半胱氨酸杂质D即N,S‑双乙酰半胱氨酸的外标法定量方法学模型。