牛流行热病毒间接ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法

摘要

本发明涉及一种检测牛流行热病毒（bovine ephemeral fever virus，BEFV）血清抗体的间接ELISA试剂盒，以及试剂盒中所用的BEFV重组抗原的制备方法和这种重组抗原。这种重组蛋白仅与BEFV抗体发生反应，而不与其它同属或同科病毒的抗体发生交叉反应，具有极高的特异性；重组蛋白还具有良好的反应敏感性。另外，试剂盒重复性良好，与病毒中和试验具有较高的符合率，保存期长。试剂盒操作时技术要求比较宽松，可在生产中广泛推广使用，应用于BEFV流行病学调查和免疫水平监测。

主权项

牛流行热病毒间接ELISA抗体检测试剂盒，包括包被抗原的酶标板，其特征在于抗原对应的基因片段位于牛流行热病毒 G基因的1141bp‑1620bp、长度为480bp，其起止位点的引物序列为SEQ ID №1和SEQ ID №2。2.根据权利要求1所述的牛流行热病毒间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于抗原为重组蛋白。3.根据权利要求1或2所述的牛流行热病毒间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于试剂盒中还有标准阳性血清、标准阴性血清、HRP标记兔抗牛抗体、血清稀释液、酶标抗体稀释液、TMB显色液、终止液和浓缩洗涤液。4.权利要求2或3的牛流行热病毒间接ELISA抗体检测试剂盒包被抗原的酶标板制备方法，其特征在于用SEQ ID №1和SEQ ID №2为上、下游引物，以牛流行热病毒 RNA为模板扩增出牛流行热病毒 G基因的1141bp‑1620bp，长度为480bp的片段，将前述扩增片段与pMD 19‑T Simple载体连接，转化感受态DH5α大肠杆菌，筛选阳性菌株，提取重组质粒pMD‑G1，再将质粒pET30a和pMD‑G1分别用内切酶NdeI和XhoI双酶切，分别回收目的DNA片段和pET30a载体片段，再连接、转化感受态BL21（DE3）大肠杆菌，筛选阳性菌株，用终浓度0.3mmol/L的IPTG进行诱导表达，表达产物经纯化后得到重组目的蛋白，以重组目的蛋白为包被抗原包被酶标板。5.权利要求4的方法制备的重组目的蛋白。