一种呼吸道病毒的生物素-亲和素酶联免疫检测方法

摘要

本发明公开了一种呼吸道病毒的生物素-亲和素酶联免疫检测方法，结合生物素-亲和素系统的高度放大作用和抗原-抗体识别的特异性，建立了一种用于检测呼吸道病毒的新的检测方法。该检测方法检测呼吸道病毒抗原的灵敏度高于ELISA，与RT-PCR比较灵敏度略低，但特异性一致，因此该技术方法能满足临床检测呼吸道病毒的要求。该检测方法易于操作，价格低廉，特别适合于呼吸道病毒感染的早期快速诊断。

主权项

一种呼吸道病毒的生物素‑亲和素酶联免疫检测方法，包括以下步骤：1)  用100μl特异性病毒抗体包被酶标板，37℃放置2小时后，4℃过夜放置，洗板，甩干；2)  加入200μl含10%小牛血清的PBS缓冲液，37℃湿盒孵育2h，洗板，甩干；3)  分别加入100μl待检病毒样品，37℃湿盒孵育1～2h，洗板，甩干；4)  加入100μl生物素标记的二抗，37℃湿盒孵育1～2h，洗板，甩干；5)  加入100μl亲和素标记的酶，37℃湿盒孵育1～2h，洗板，甩干；6)  加入100μl显色底物，37℃孵育5～15min进行显色反应，用酶标仪测定OD值；以大于阴性对照值OD值3SD作为阳性结果的阈值；上述方法用于非疾病的诊断；步骤1）中，用pH9.6的0.05mol/L碳酸盐缓冲液将特异性病毒抗体稀释至1～10μg/ml浓度后包被酶标板；上述洗板所用洗涤液为含0.5mol/L Tween‑20的PBS缓冲液；步骤6）中，显色反应结束后，加入50μl 2mol/L的硫酸溶液，使反应终止。