溪黄草药材HPLC指纹图谱的建立

摘要

本发明公开了一种溪黄草药材指纹图谱的建立及其指纹图谱，涉及中药药材的质量控制方法，具体是建立HPLC指纹图谱以检测溪黄草药材提取液的方法。本发明步骤为，对照品溶液的制备；提取溶剂与方法的选择；样品溶液的制备；色谱条件考察：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为0.1%～0.3%乙腈-磷酸组成的梯度洗脱液，柱温：25～40℃，紫外检测波长为230～270nm，时间100～120min；不同品种溪黄草药材HPLC指纹图谱测定；特征峰的标记与参照峰的选择。本发明的有益效果：解决溪黄草的入药基源争议。综合运用了指纹图谱的共有峰比较、聚类分析和特有峰分析等方法对三个品种溪黄草HPLC指纹图谱进行鉴别，实现对溪黄草药材的基源鉴别，划分了产地归类，为溪黄草药材的质量控制、临床正确使用提供依据。

主权项

一种溪黄草药材指纹图谱的建立方法，其特征在于采用高效液相色谱法，具体包括如下步骤：①、对照品溶液的制备：精密称取对照品咖啡酸、6‑C‑吡喃阿拉伯糖基‑8‑C‑吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸，以甲醇为溶剂，配成咖啡酸浓度为0.092mg/mL、6‑C‑吡喃阿拉伯糖基‑8‑C‑吡喃葡萄糖基芹菜素为0.238mg/mL、牡荆苷为0.179mg/mL和迷迭香酸为0.115mg/mL的混合对照品溶液；②、样品溶液的制备：准确称定溪黄草药材粉末，精密加入50％乙醇20mL，摇匀，滤过，作为供试品溶液；③、色谱条件：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用梯度洗脱，流动相为乙腈‑磷酸组成的梯度洗脱液，紫外检测波长为230～270nm，具体的梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行：0分钟时，流动相A为8％的乙腈溶液、流动相B为92％的0.3％的磷酸溶液；5分钟时，流动相A为12％的乙腈溶液、流动相B为88％的0.3％的磷酸溶液；30分钟时，流动相A为18％的乙腈溶液、流动相B为82％的0.3％的磷酸溶液；60分钟时，流动相A为23％的乙腈溶液、流动相B为77％的0.3％的磷酸溶液；80分钟时，流动相A为50％的乙腈溶液、流动相B为50％的0.3％的磷酸溶液；100分钟时，流动相A为70％的乙腈溶液、流动相B为30％的0.3％的磷酸溶液；120分钟时，流动相A为90％的乙腈溶液、流动相B为10％的0.3％的磷酸溶液；④、测定：精密吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到指纹图谱，其特征在于：通过高效液相色谱仪获得的指纹图谱是联合运用色谱峰保留时间t和二极阵列检测器采集各色谱峰紫外光谱UV确定4个特征峰；其中，S4号峰迷迭香酸的峰高最高，且均为4个品种溪黄草药材均含有的色谱峰，峰面积最大，与相邻峰分离度较好，在测定时比较稳定，因此选作参照峰；咖啡酸、6‑C‑吡喃阿拉伯糖基‑8‑C‑吡喃葡萄糖基芹菜素、牡荆苷和迷迭香酸均为线纹香茶菜、狭基线纹香茶菜和纤花线纹香茶菜共有的色谱峰，分别为2‑S1、3‑S2、5‑S3、9‑S4峰，而溪黄草仅有咖啡酸和迷迭香酸峰，分别为3‑S1、15‑S4峰；指纹图谱中特征峰的差异可作为区别溪黄草与正品线纹香茶的标准。