一种明胶亲和层析介质的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种明胶亲和层析介质的制备及其利用明胶亲和层析介质分离纯化纤维连接蛋白的方法。将CNBr-琼脂糖亲和层析介质用激活液清洗激活配基，再用结合液清洗；配制明胶溶液，加入已用结合液清洗的CNBr-琼脂糖亲和层析介质，控温搅拌偶联；检测明胶偶联浓度，结合液清洗，封闭液控温搅拌封闭；酸清洗液和碱清洗液交替清洗，再用水清洗得到明胶亲和层析介质；将明胶亲和层析介质装入层析柱中；用平衡液平衡层析柱；将样品流穿明胶亲和层析介质；用清洗液清洗杂蛋白；用洗脱液洗脱纤维连接蛋白；用酸碱清洗液清洗再生明胶亲和层析介质。本发明所述一种明胶亲和层析介质的制备方法具有纯化效率高、生产周期短、工艺简单等优点。

主权项

一种明胶亲和层析介质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)利用激活液清洗CNBr‑琼脂糖亲和层析介质，去除激活液；再用结合液清洗CNBr‑琼脂糖亲和层析介质，去除结合液，得到已激活的CNBr‑琼脂糖亲和层析介质；所述激活液为HCl溶液或NaCl‑HCl溶液，pH为2.0‑4.5；所述结合液为NaCl‑NaHCO₃溶液，pH为7.0‑8.6；2)利用结合液配制明胶的浓度为5‑20mg/mL的明胶溶液，混匀；3)向步骤2)得到的明胶溶液中加入等体积的步骤1)中已激活的CNBr‑琼脂糖亲和层析介质，4‑35℃条件下搅拌偶联1‑24小时；4)偶联完毕，过滤，得到滤液和已偶联的明胶亲和层析介质；检测并计算CNBr‑琼脂糖亲和层析介质结合明胶的浓度；5)将步骤4)得到的已偶联的明胶亲和层析介质抽干，用封闭液清洗，所述封闭液为HO(CH₂)₂NH₂或pH为7.0‑8.6的0.001‑1.0mol/L Tris‑HCl，去除封闭液后，再加入等体积的封闭液进行封闭，得到封闭液处理后的明胶亲和层析介质；6)将步骤5)得到的封闭液处理后的明胶亲和层析介质抽干，利用酸清洗液和碱清洗液交替清洗，再用水清洗，加入乙醇溶液保存，得到明胶亲和层析介质；所述碱清洗液为NaCl‑Tris溶液，pH为7.0‑8.6；所述酸清洗液为NaCl‑NaAc溶液，pH为2.0‑4.5。