一种固载甲基转移酶电极传感器的制备及应用

摘要

本发明公开了一种固载甲基转移酶电极传感器的制备方法，其特征是：（1）将预处理的铂盘电极采用电化学聚合法制备聚3-噻吩乙酸膜电极；（2）然后将聚3-噻吩乙酸膜电极氨基化；（3）再将氨基化的聚3-噻吩乙酸膜电极交联方法固载甲基转移酶，得到固载甲基转移酶电极传感器。用该电极快速检测样品中SAM，该方法灵敏度高、选择性好、响应时间短、干扰少，优于其它检测方法，是一种简单快速、方便易行的SAM测定方法，本申请制备的固载甲基转移酶电极传感器成本低、特异性好，具有实现自动化现场测定的潜力。

主权项

一种固载甲基转移酶电极传感器的制备方法，特征在于，该方法具有以下工艺步骤：（1）铂电极预处理：将直径为3 mm的铂盘电极，对电极、参比电极均使用直径为0.5 mm的Pt丝依次用1.0 µm 、0.3 µm 、0.05 µm的Al₂O₃泥浆抛光打磨成镜面，并在超声清洗仪中先后用乙醇、水超声清洗5 min，以清洗后的铂盘电极做为工作电极，于1.0 mol L^‑1的硫酸溶液中以 0.1 V s^‑1 的速度从‑0.2到+1.5 V电位范围内进行循环伏安扫描至稳定，得到预处理铂电极；（2）聚3‑噻吩乙酸膜电极制备：将含有3‑噻吩乙酸的质量百分浓度为35~45%的 N‑甲基吡咯烷酮溶液通入氮气除氧15~20min除氧后，加入0.5~1.0 mL三氟化硼乙醚作为电解质，将预处理电极放入，采用计时电流法在电压为1.4 V，时间为70‑90 s 的条件下合成3‑噻吩乙酸膜电极，将合成的聚合膜在80 ℃的真空干燥箱中干燥12小时以除去电极上的溶剂，得到聚3‑噻吩乙酸膜电极；（3）氨基化聚3‑噻吩乙酸膜电极制备：在反应器中，按如下组成的质量百分浓度加入，氯化亚砜：60~75%，N,N‑二甲基甲酰胺：5~12%，混合均匀，将聚3‑噻吩乙酸膜电极放入，室温反应24~30h，温度升到55~60℃恒温反应4~5 h，滴加乙二胺：18~30%，再于55~60℃恒温反应2~3 h，取出电极，用N,N‑二甲基甲酰胺洗涤，于60℃干燥，放入质量百分浓度为12%的戊二醛溶液中，超声50~60min，取出干燥，得到氨基化聚3‑噻吩乙酸膜电极；（4）甲基转移酶固定液的制备：在反应器中，按甲基转移酶与DNA质量比为1：1加入，甲基转移酶与DNA溶解在pH值为7.2的磷酸盐缓冲溶液中，溶液中含甲基转移酶与DNA的浓度都在12~15mg/mL范围内，该溶液为甲基转移酶固定液；（5）固载甲基转移酶电极传感器的制备方法：取步骤（4）制备的甲基转移酶固定液滴涂到步骤（3）制备的氨基化聚3‑噻吩乙酸膜电极上，滴涂的量为22~30μL，在5~8℃干燥，即得固载甲基转移酶电极传感器。