一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中狗肉的LAMP检测方法

摘要

本发明涉及一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中狗肉的LAMP检测方法，属于分子生物学检测技术领域。本发明的检测方法以待测肉品的DNA作为模板、以DF3、DB3、DFIP、DBIP为引物构建LAMP检测体系；LAMP检测体系于64℃恒温水浴中反应40min，反应结束后向反应液中加入1uL荧光染料SYBR GREEN Ⅰ；若反应液变成绿色，说明待测肉品中存在狗肉；若为橘黄色，则待测肉品中不存在狗肉。本发明的检测方法与传统PCR相比，在普通恒温水浴锅中反应40min即可完成，而且可以通过在终产物中加入染料的方法直接用肉眼观察结果，能快速准确地鉴定出动物源性成分；具备操作简便、对实验仪器要求较低、结果判定容易的优点。

主权项

一种利用线粒体DNA鉴别牛羊肉中狗肉的LAMP检测方法，其特征在于,以待测肉品的DNA作为模板、以DF3、DB3、DFIP、DBIP为引物构建LAMP检测体系；LAMP检测体系于64℃恒温水浴中反应40min，反应结束后向反应液中加入1 uL荧光染料SYBR GREEN Ⅰ；若反应液变成绿色，说明待测肉品中存在狗肉；若为橘黄色，则待测肉品中不存在狗肉；    所用引物如下：DF3: TTATTTACAGTAGGCGGGTT，如SEQ ID NO.1所示，DB3: GTAAAGTGAATCTTTGCTCAAG，如SEQ ID NO.2所示，DFIP: ACATAGTGAAAATGAGCCACAACATATTGTCCTAGCTAATTCGTCC，如SEQ ID NO.3所示，DBIP:CTTTCAATAGGAGCAGTTTTTGCCTATCGTTAAGAGTATAACCTGAGA，如SEQ ID NO.4所示，    所述LAMP检测体系，总体积为25uL；其组成如下10umol/L的DF3、DB3各0.5uL，10umol/L 的DFIP、DBIP各4uL，2.5mmol/L的 dNTP 4uL，50mmol/L的 MgSO₄ 2uL，5mol/L的Betaine2.5uL，Bst DNA聚合酶1uL，10×Thermo buffer 2.5uL，模板2uL，余量为超纯水。