荧光定量RT-PCR实时鉴别检测猪瘟强毒株和疫苗毒株的方法

摘要

一种荧光定量RT-PCR实时鉴别检测猪瘟强毒株和疫苗毒株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计特异性引物3-UTR，其序列为：3-UTR For：5’-GTAGGACCCTATTGTAGATAA-3’；3-UTR Rev：5’-AGTTTATACCAGTTCTTACTCATTC-3’；2)对采集的血样进行编号，提取血样总RNA；3)以提取的总RNA为模板，用TARAKA试剂盒进行反转录得cDNA；4)以步骤3)反转录所得cDNA为模板，加入特异性引物，用TARAKA的SYBRgreen试剂盒进行荧光定量PCR扩增，记录实时荧光定量PCR扩增曲线、溶解曲线以及电泳结果，根据记录结果鉴别猪瘟病毒株；其中，特异性引物的终浓度为0.4μMol/L，PCR反应条件为：95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共40循环。为猪瘟疫病控制及净化提供了可靠技术保障。

主权项

一种荧光定量RT‑PCR实时鉴别检测猪瘟强毒株和疫苗毒株的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计特异性引物3‑UTR，其序列为：3‑UTR For：5’‑GTAGGACCCTATTGTAGATAA‑3’；3‑UTR Rev：5’‑AGTTTATACCAGTTCTTACTCATTC‑3’；2)对采集的血样进行编号，提取血样总RNA；3)以提取的总RNA为模板，用TARAKA试剂盒进行反转录得cDNA；4)以步骤3)反转录所得cDNA为模板，加入特异性引物，用TARAKA的SYBRgreen试剂盒进行荧光定量PCR扩增，记录实时荧光定量PCR扩增曲线、溶解曲线以及电泳结果，根据记录结果鉴别猪瘟病毒株；其中，特异性引物的终浓度为0.4μMol/L，PCR反应条件为：95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共40循环。