基于多信号放大技术的双电极传感器检测急早幼粒PML/RARα基因序列的方法

摘要

本发明公开一种基于多信号放大技术的双电极传感器检测急早幼粒PML/RARα基因序列的方法，将两个独立的金电极整合在同一个工作电极上，即在同一电极表面上的不同区域嵌入两个面积相同的金片，构成双金电极集成式工作电极，可以实现在同一工作电极上直接组装两组不同序列的检测探针用以分别测定PML/RARα融合基因 dsDNA的两条互补序列；采用多信号放大技术、双探针检测方法与电化学酶联放大技术实现同时检测APL的PML/RARα融合基因双链DNA中的两条互补链。采集两组探针与相对应的互补链杂交后催化产生的电流信号并进行计算处理，可定量检测靶标dsDNA。实现了对急性早幼粒细胞白血病的早期诊断。

主权项

一种基于多信号放大技术的双电极传感器，包括有两组检测探针，其特征在于一组检测探针是一捕获探针和两报告探针，另一组检测探针是另一捕获探针和另两报告探针，在同一电极表面上的不同区域嵌入两个面积相同的金片而构成双金电极集成式工作电极，将两捕获探针相应固定在双金电极集成式工作电极不同区域的两个面积相同的金片上，对电极表面未结合的位点通过封闭剂进行封闭；将两组检测探针中的四个报告探针提前混于含有靶标 dsDNA 的杂交液中，通过高温变性使双链 DNA 解链成单链，并将变性后的杂交液置于冰浴中保持杂交溶液中 DNA 单链状态；两条单链靶标 DNA 的一端分别与两条5' 端标记有生物素的报告探针和两条3' 端标记有生物素的报告探针杂交，然后利用两条长链靶标链的另一端分别与捕获探针通过碱基配对结合实现共杂交，将分别与两组探针新形成 dsDNA 片段固定在工作电极相应的区域上；通过辣根过氧化物酶上的链霉亲和素，根据亲和素与生物素之间的亲和作用，将酶结合上去，利用酶的信号放大作用，将修饰电极同时置于相同的底物3,3',5,5'‑四甲基联苯胺中，利用电化学双通道工作站同时采集电信号。