利用基因芯片结合Real time PCR筛选的烟草内参基因及其方法

摘要

本发明公开了一种利用基因芯片结合Real time PCR筛选的烟草内参基因及其方法，应用本发明的方法，筛选得到烟草新的内参基因烟草磷酸核酮糖激酶基因和烟草双半乳糖二酰甘油合酶基因，其中磷酸核酮糖激酶基因的稳定性高于目前所有报道的烟草内参基因，而烟草双半乳糖二酰甘油合酶基因的稳定性仅次于目前报道烟草内参基因EF-1-a。

主权项

一种利用基因芯片结合Real time PCR筛选烟草内参基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)首先利用NimbleGen双通道基因芯片分析栽培品种K326的3个部位根、茎、叶，每个部位6个时期，以及花的3个时期，共21个样本的基因的表达量，利用geNorm3.5计算出每个基因在21个样本中的变异系数，表征其稳定性，变异系数小于目前应用的内参的基因作为内参的候选基因；2)利用Real time PCR验证芯片杂交的结果，即用Real time PCR验证烟草3个部位根、茎、叶，每个部位6个时期，以及花的3个时期，共21个样本的基因的表达量，利用geNorm3.5计算出每个基因在21个样本中的变异系数，表征其稳定性，变异系数小于目前应用的内参的基因作为筛选的烟草内参；筛选得到烟草内参基因为：烟草磷酸核酮糖激酶基因gene 7,序列为SEQ ID NO:4；烟草双半乳糖二酰甘油合酶基因gene15,序列为SEQ ID NO:9。