一种小麦抗赤霉离体定向选择育种方法

摘要

本发明属于作物抗病遗传育种技术领域，提供一种小麦抗赤霉离体定向选择育种方法。该方法包括(1)禾谷镰刀菌菌株的分离和培养(2)粗毒素获得(3)杂交F1代种子获得(4)抗性小孢子雄核发育(5)抗性愈伤组织分化(6)单倍体幼苗获得(7)抗赤霉株获得(8)加倍单倍体个体进行抗赤霉特性鉴定即可筛选到稳定的抗赤霉株系。利用毒素协迫杂种F1代花药组织中由于基因重组存在的广范的小孢子基因型变异和海量小孢子细胞群体，通过抗性基因型小孢子和非抗性基因型小孢子对毒素敏感性的差异而筛选抗性基因型的技术方法，选择特性是定向的，选择群体大，选择效率高。

主权项

一种小麦抗赤霉离体定向选择育种方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)禾谷镰刀菌菌株的分离和培养：选择感染禾谷镰刀菌的小麦，接种于麦粒培养基中，24℃‑26℃散光条件下产毒培养28‑32天；(2)粗毒素获得：将步骤(1)培养28‑32天的镰刀菌产毒麦粒培养物，58‑62℃恒温烘干，将烘干物用乙酸乙酯浸提22‑26hs，抽滤浸提物，常温挥干，挥干物用85％乙醇溶解，静置过夜后，除去非极性脂，得到粗提毒素；(3)杂交F1代种子获得：以抗赤霉基因型亲本与任一另一种小麦杂交获得F1代种子；杂交方法按照常规操作；(4)抗性小孢子雄核发育：取杂种F1代花粉细胞发育到单核中期至单核靠边期的小麦幼穗，经75％乙醇表面消毒后，剥取花药组织接种到毒素协迫的小麦花药愈伤组织诱导培养基上，于25℃～27℃条件下遮光条件下诱导抗性小孢子雄核发育；(5)抗性愈伤组织分化：待培养的花药组织中抗性小孢子雄核脱分化产生小米粒大小的愈伤组织时，将其转入到花药愈伤组织分化培养基中，置3000Lx～4000Lx光照强度下诱导愈伤组织的分化，培养温度为25℃～27℃；(6)单倍体幼苗获得：待花粉愈伤组织诱导的小苗长到2‑3片小叶时，及时切去小苗转入到生根壮苗培养基中诱导生根；(7)抗赤霉株获得：将生根壮苗后的单倍体植株及时移栽到营养钵中，于15℃、1500Lx光照条件下缓苗，待完全缓苗且进一步生长10天后，用含0.1％的秋水仙素和1.5％的二甲基亚砜的染色体加倍液注射分蘖节，对花粉植株进行染色体加倍，注射在清晨8～10时进行，共3次，每隔一天注射1次，每次用量25μL，花粉植株经染色体加倍后得到抗赤霉株；(8)加倍单倍体个体进行抗赤霉特性鉴定即可筛选到稳定的抗赤霉株系。