一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法

摘要

本发明提供了一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：（1）胎盘源母体间充质干细胞的分离；和（2）胎盘源母体间充质干细胞的培养。其中，步骤（1）使用了trypLE^TM酶溶液分两步处理胎盘组织；步骤（2）使用无血清培养基。本发明的方法经过短串联重复序列（STR）图谱分析为完全母体来源，经染色体核型检查，细菌、真菌和病毒的病原微生物检查，细胞纯度鉴定，细胞生物学功能鉴定为合格。因此，本发明方法获得的胎盘源母体间充质干细胞不含异种蛋白，可以满足临床使用的需要，尤其适合母亲自己使用，也为建立优良的胎盘源母体间充质干细胞库提供了技术保障。

主权项

一种胎盘源母体间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)胎盘源母体间充质干细胞的分离：取包含有母体间充质干细胞的胎盘组织，分离出胎盘底蜕膜部分，先用机械方法将胎盘底蜕膜部分处理成组织块小片，用trypLE^TM酶溶液37℃消化组织块(0.3‑0.5)小时，清洗去除消化液后，再用trypLE^TM酶溶液37℃消化组织块(0.5‑1)小时，得到消化后的消化液，过滤后将细胞悬液离心，即获得胎盘源母体间充质干细胞；(2)胎盘源母体间充质干细胞的培养：将上述步骤(1)获得的细胞按(0.5‑2)×10⁴/cm²的密度接种到培养瓶中，置于37℃、饱和湿度、5％的CO₂培养箱中进行原代细胞培养，细胞培养到80‑90％融合时，用trypLE^TM消化，按分种率(1：2)‑‑(1：10)接种到新培养瓶中培养；经过数次传代后，将细胞作为原代传代细胞库，冻存到液氮中保存。