基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒

摘要

本发明提供一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒，该试剂盒采用粪便的前处理、粪便中微生物细胞的裂解、DNA的游离与杂蛋白的抽除、DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除和DNA洗脱步骤，在破碎细胞后先用CTAB溶液去除蛋白杂质，同时利用硅胶模吸附柱吸附基因组DNA，最后在采用特有的去蛋白液和漂洗液洗去剩余的蛋白杂质。常规的动物粪便微生物基因组提取方法需要14h以上的时间，长时间的操作容易造成基因组的降解。与常规的动物粪便微生物基因组提取方法相比，该试剂盒仅需4h即可提取到动物粪便基因组，不仅节省了大量提取时间，同时简化了实验步骤，能够更有效、快速、经济地提取到动物粪便微生物基因组。

主权项

一种基于CTAB法快速提取动物粪便基因组的试剂盒 ，包括粪便的前处理、粪便中微生物细胞的裂解、DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱，其特征是：粪便的前处理：称取0.3‑0.5g新鲜粪便于2ml离心管中，加入1‑2ml Buffer A振荡1‑2min， 3000‑5000rpm/min离心10‑20min，转移上清至新的离心管中，10000‑12000rpm/min离心10‑20min，弃上清，保留沉淀；粪便中微生物细胞的裂解：往沉淀中加入450‑600μl Buffer B和50‑60μl Buffer C，混匀后37‑40℃水浴1‑2h，加入65‑70μl Buffer D和65‑70μl Buffer E，混匀后37‑60℃水浴1‑2h，加入100‑200μl Buffer F和50‑100μl Buffer G溶液，65‑80℃水浴10‑20min；DNA的游离与杂蛋白的抽除：往溶液中加入600‑800μl Buffer H，振荡器震荡30‑60s后，12000‑13000rpm/min 离心10‑20min，将上清移至新的离心管中，加入等体积的Buffer I，12000‑13000rpm/min 离心10‑20min，将上清移至新的离心管中；DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入两倍体积的沉淀剂，混匀后加入DNA吸附柱，10000‑13000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入500‑600μl去蛋白液， 10000‑13000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入300‑500μl漂洗液，12000‑13000rpm/min 离心1‑2min，弃废液，加入500‑600μl漂洗液， 12000‑13000rpm/min 离心1‑2min，弃废液， 12000‑13000rpm/min 离心1‑2min，静置吹干；DNA洗脱：往吸附柱中加入30‑60μl洗脱液，12000‑13000rpm/min 离心1‑2min，所得液体为粪便微生物基因组，取3‑6μl DNA水溶液，于1‑2%琼脂糖凝胶中电泳检测。