用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的引物和探针

摘要

本发明提供用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的引物和探针。本发明还提供一种使用本发明的引物和探针检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的方法及试剂盒。本发明提供的引物和探针具有高灵敏度和特异性，该检测方法可提供用于结直肠肿瘤早期诊断的信息，为结直肠肿瘤早发现提供了一个简便易行的解决方案。

主权项

用于检测生物样本中BMP3和NDRG4甲基化水平的引物，其特征在于，包括正向引物，一条选自(A)组的正向引物和一条选自(B)组的正向引物；(A)BMP3正向引物GTTTAATTTTCGGTTTCGTCGTC(SEQ ID NO：1)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：2)AATATTCGGGTTATATACGTCGCGA(SEQ ID NO：3)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：4)TTGAAAATATTTGGGTTATATATGTTGT(SEQ ID NO：5)GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO：6)TGGAGTGGAGATGGTGTTTGT(SEQ ID NO：7)TTAGGTTGCGTTGGGTTAGCG(SEQ ID NO：8)TTGTTAGGTTGTGTTGGGTTAGTG(SEQ ID NO：9)GGTGAGGTTCGCGTAGTTGTTG(SEQ ID NO：10)GTGAGGTTTGTGTAGTTGTTGGG(SEQ ID NO：11)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：12)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：13)GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO：14)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：15)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：16)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：17)AATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：18)TATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：19)TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTYGY(SEQ ID NO：20)TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：21)TTTGAAAATATTTGGGTTATATACGTTGC(SEQ ID NO：22)TTTGAAAATATTCGGGTTATATACGTTGC(SEQ ID NO：23)TTTGAAAATATTTGGGTTATATACGTCGC(SEQ ID NO：24)TTTGAAAATATTYGGGTTATATACGTYGC(SEQ ID NO：25)AATATTCGGGTTATATACGTCGCGATT(SEQ ID NO：26)AGGAGGGAAGGTATAGATAGATTTTGAA(SEQ ID NO：27)GAGTGGAGACGGCGTTCGTA(SEQ ID NO：28)GGAGTGGAGACGGCGTTC(SEQ ID NO：29)GAGTGGAGACGGCGTTC(SEQ ID NO：30)GGCGTTCGTAGCGTTTTGC(SEQ ID NO：31)GCGTTCGTAGCGTTTTGC(SEQ ID NO：32)TTTGGAGTTTAATTTTCGGTTTC(SEQ ID NO：33)AGTGGGGTTGGTCGTTATTTC(SEQ ID NO：34)TTGAAAATATTTGGGTTATATATGTTGT(SEQ ID NO：35)TGGAGTGGAGATGGTGTTTGT(SEQ ID NO：36)TTGTTAGGTTGTGTTGGGTTAGTG(SEQ ID NO：37)GTGAGGTTTGTGTAGTTGTTGGG(SEQ ID NO：38)(B)NDRG4正向引物CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCG(SEQ ID NO：39)CGAAACTTCAACGCCGCCGAC(SEQ ID NO：40)GTACGTGGAGGGGTTTTTGGTTG(SEQ ID NO：41)CGCGCAAACAAAAAACGAAACTTCGA(SEQ ID NO：42)GAGTGGGTGAGAAGTCGGTGGGG(SEQ ID NO：43)GGCGGAGTGGGTGAGAAGTCG(SEQ ID NO：44)GGGTTTTTGGTTGTTCGTATTTGTATT(SEQ ID NO：45)CGGTTTTCGTTTTTGTAGTCGCGGGT(SEQ ID NO：46)GCGGAGGGGTTTTTGGTTGTTCG(SEQ ID NO：47)GCGGGTGAGAAGTCGGC(SEQ ID NO：48)CGGAGCGGGTGAGAAGTC(SEQ ID NO：49)CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCGT(SEQ ID NO：50)CGGTTTTCGTTCGTTTTTTCG(SEQ ID NO：51)ATYGATYGGGGTGTTTTTTAGGTTTY(SEQ ID NO：52)ATCGATCGGGGTGTTTTTTAGGTTTC(SEQ ID NO：53)ATCGATTGGGGTGTTTTTTAGGTTTT(SEQ ID NO：54)ATCGATTGGGGTGTTTTTTAGGTTTC(SEQ ID NO：55)ATCGATCGGGGTGTTTTTTAGGTTTT(SEQ ID NO：56)GGGTGTTTTTTAGGTTTCGCGTC(SEQ ID NO：57)；和反向引物，一条选自(C)组的反向引物和一条选自(D)组的反向引物；(C)BMP3反向引物CTCCCGACGTCGCTACG(SEQ ID NO：58)CCTCACCCGCGCAAAACG(SEQ ID NO：59)CGCGAACCTCACCCGCGCAA(SEQ ID NO：60)CCTCACCCGCGCAAAACG(SEQ ID NO：61)ACCTCACCCACACAAAACACT(SEQ ID NO：62)CCACTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：63)CCACTTACTACACTAACCCAACAC(SEQ ID NO：64)ACTCCGAAAACGCAAAAAACCG(SEQ ID NO：65)AACACTCCAAAAACACAAAAAACC(SEQ ID NO：66)CACTCCGAAAACGCAAAAAACCG(SEQ ID NO：67)ACACTCCAAAAACACAAAAAACCAAC(SEQ ID NO：68)CCACTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：69)CCACTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：70)CCACTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：71)CACTCCGAAAACGCAAAAAACCG(SEQ ID NO：72)CACTCCGAAAACGCAAAAAACCG(SEQ ID NO：73)CACTCCGAAAACGCAAAAAACCG(SEQ ID NO：74)CCTCACCCGCGCAAAACG(SEQ ID NO：75)ACCTCACCCGCGCAAAACG(SEQ ID NO：76)ATAAACTCTTCCCCAACAACTACRCRAA(SEQ ID NO：77)ATAAACTCTTCCCCAACAACTACGCGAA(SEQ ID NO：78)ATAAACTCTTCCCCAACAACTACACAAA(SEQ ID NO：79)ATAAACTCTTCCCCAACAACTACACGAA(SEQ ID NO：80)ATAAACTCTTCCCCAACAACTACGCAAA(SEQ ID NO：81)GCAACCTAACAAATAAACTCTTCCCCAA(SEQ ID NO：82)AACAAATAAACTCTTCCCCAACAACTAC(SEQ ID NO：83)CCACTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：84)ACTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：85)CTTACTACGCTAACCCAACG(SEQ ID NO：86)ACTCCCGACGTCGCTACG(SEQ ID NO：87)TCCAAACCAACTAAAACGAAAAC(SEQ ID NO：88)ACCTCACCCACACAAAACACT(SEQ ID NO：89)CCACTTACTACACTAACCCAACAC(SEQ ID NO：90)AACACTCCAAAAACACAAAAAACC(SEQ ID NO：91)ACACTCCAAAAACACAAAAAACCAAC(SEQ ID NO：92)(D)NDRG4反向引物TCGTTTATCGGGTATTTTAGTCGCGTAG(SEQ ID NO：93)GTAACTTCCGCCTTCTACGC(SEQ ID NO：94)AAACCGCGACGCGAAACC(SEQ ID NO：95)GACCCGCGAAACGATACCG(SEQ ID NO：96)AAGCAAAAAGCAAACGCGC(SEQ ID NO：97)CACCGCGAAAATACGAACGAAAC(SEQ ID NO：98)GAACGAAACAAACGCGCAAACG(SEQ ID NO：99)TAAAATACCCGATAAACGAACG(SEQ ID NO：100)GTAACTTCCGCCTTCTACGC(SEQ ID NO：101)CGTAACTTCCGCCTTCTACGC(SEQ ID NO：102)TCGCGCGTAACTTCCGCCTT(SEQ ID NO：103)CGATCCCTCGCGCGTAACTT(SEQ ID NO：104)TCGCGCGTAACTTCCGCCTT(SEQ ID NO：105)GTAACTTCCGCCTTCTACGC(SEQ ID NO：106)CCTTCTACRCRACTAAAATACCCRAT(SEQ ID NO：107)CCTTCTACGCGACTAAAATACCCGAT(SEQ ID NO：108)CCTTCTACACAACTAAAATACCCGAT(SEQ ID NO：109)CCTTCTACACGACTAAAATACCCGAT(SEQ ID NO：110)CCTTCTACGCAACTAAAATACCCGAT(SEQ ID NO：111)AACCTAAAACTAATCCCGAACGAACC(SEQ ID NO：112)GCGCGTAACTTCCGCCTTCTA(SEQ ID NO：113)。