磁珠法提取革兰氏阴性菌基因组的方法

摘要

本发明涉及一种磁珠法提取革兰氏阴性菌基因组的方法，属于生物技术领域。本发明提供一种磁珠法提取革兰氏阴性菌基因组的方法，包括革兰氏阴性菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，磁珠法快速纯化基因组DNA。与传统方法相比，利用该方法能够方便、快捷地提取革兰氏阴性菌基因组，与常规的革兰氏阴性菌基因组提取方法相比仅需3h就能提取到革兰氏阴性菌基因组，本发明不仅节省了大量提取时间，同时简化了实验步骤，能够更有效、快速、经济地提取到革兰氏阴性菌基因组DNA。

主权项

一种磁珠法提取革兰氏阴性菌基因组的方法，包括革兰氏阴性菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，磁珠法快速纯化基因组DNA，其特征是：革兰氏阴性菌细胞的破碎：取1.5ml革兰氏阴性菌过夜培养液加到1.5ml离心管中，10000‑13000rpm/min 离心1‑5分钟后弃上清；往菌体沉淀中加入0.5‑1ml 溶菌酶溶液悬浮沉淀，37°C温育2‑4h；加入0.5‑1ml十二烷基硫酸钠溶液，反复颠倒混匀10‑20min，10000‑13000rpm/min 离心10‑20分钟后取上清至新的1.5ml离心管；DNA的游离与杂蛋白的抽除：加入200‑600μl 酚、氯仿和异戊醇混合液抽提，混合液体积比为酚：氯仿：异戊醇为25:24:1，10000‑13000rpm/min 离心10‑20分钟，将上清转移至干净的1.5ml离心管中；加入200‑600μl氯仿和异戊醇混合液抽提，其体积比氯仿：异戊醇为24:1，10000‑13000rpm/min 离心10‑20分钟，将上清转移至干净的1.5ml离心管中；磁珠法快速纯化基因组DNA：往离心管中加入等体积的 Buffer A；震荡10‑30s；室温放置1‑10min，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离；待磁珠吸附到离心管一侧时，吸去液体，保留磁珠；往含有磁珠的离心管中加入0.5‑1.5ml Buffer B,打匀后室温静止5‑10min，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离；待磁珠吸附到离心管一侧时吸去液体，保留磁珠；往含有磁珠的离心管中加入30‑60μl Buffer C，将离心管放在磁力架上，进行磁珠分离；待磁珠吸附到离心管一侧时吸取液体，此溶液即为革兰氏阴性菌基因组DNA产物，于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。