一种基于双淬灭基团核酸自组装技术的双酚A检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于双淬灭基团核酸自组装技术的双酚A检测方法及检测试剂盒。设计了2种茎环结构DNA，其中一个修饰荧光基团，另外一个修饰两个淬灭基团，在有双酚A存在的情况下，2种茎环结构DNA可不断开环杂交，从而使荧光基团和淬灭基团靠近，发生荧光能量转移，从而把荧光淬灭。本发明检测方法的信号扩增源于两个茎环DNA的不断开环互补，无需使用任何蛋白酶，操作简单，可在室温下完成反应，灵敏度高、选择性好。在其中一个茎环结构DNA上同时有2个淬灭基团，可更有效地淬灭另一茎环结构DNA上的荧光基团，从而有效地减少了荧光背景，极大地提高了检测灵敏度，检测限为0.4pM。

主权项

一种基于双淬灭基团核酸自组装技术的双酚A检测试剂盒，其包括以下组分：（1）DNA1：由双酚A的核酸适体的5'端或3'端延伸至少24个碱基所形成，从5’至3’依次包括b*区域、a*区域和双酚A核酸适体区域；（2）DNA2：DNA2与DNA1的a*区域和部分双酚A核酸适体区域互补；（3）DNA H1：DNA H1上修饰有荧光基团，从5’至3’依次包括a、b、c和b*区域，b和b*区域互补形成茎环结构；（4）DNA H2：DNA H2上修饰有荧光淬灭基团，从5’至3’依次包括b*、a*、b和c*区域，b和b*区域互补形成茎环结构；以上DNA分子中，a、b、c区域分别与a*、b*、c*区域互补，DNA H2的c*和b区域分别与DNA H 1上的c和b*区域互补形成双链，从而使得DNA H1和DNA H2两个茎环结构打开，打开后的DNA H2中的荧光淬灭基团靠近DNA H1的荧光基团，从而把荧光淬灭。