一种表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组病毒疫苗株

摘要

本发明提供一种表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组新城疫病毒疫苗株的制备方法及重组新城疫病毒疫苗株。本发明的方法包括：构建其中插入非洲猪瘟病毒（ASFV）的p72基因的重组转录质粒，构建转录辅助质粒系统，将上述转录质粒和转录辅助质粒共转染所述新城疫致弱株可以复制的宿主细胞BHK-21，拯救获得重组病毒株。利用本发明制备的表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的疫苗株，在防控该动物疫病方面具有重要的储备和战略意义，并可在治疗与预防非洲猪瘟病毒中应用。

主权项

表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组病毒疫苗株的制备方法，其特征在于该方法包括：（1）构建重组转录质粒，该转录质粒包括其中插入非洲猪瘟病毒（ASFV）的p72基因的所述新城疫弱毒疫苗株的基因组cDNA序列，然后在转录载体质粒pBSK中连接组装获得重组转录质粒pBSK‑MG7‑ASFVp72，其中：新城疫弱毒疫苗株MG7是通过反向遗传学改造，将其F蛋白裂解位点替换为Lasota株F蛋白的裂解位点，由此突变致弱的的人工致弱毒株； （2）构建转录辅助质粒系统，该辅助质粒系统包括编码所述新城疫病毒致弱株的核蛋白（NP）的cDNA序列的辅助质粒pBSK‑NP和所述新城疫病毒致弱株的磷蛋白（P）的cDNA序列的辅助质粒pBSK‑P以及所述新城疫病毒致弱株的大聚合酶蛋白（L）的cDNA序列的辅助质粒pBSK‑L；（3）将上述转录质粒和转录辅助质粒共转染所述新城疫致弱株可以复制的宿主细胞BHK‑21，培养转染后的宿主细胞；（4）收获上清液，过滤后接种鸡胚尿囊腔拯救重组病毒株。