一种重组酵母菌株及其构建方法和应用

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，公开了一种重组酵母菌株及其构建方法和应用。所述重组酵母菌株敲除gal1、gal7、gal10和ypl062w基因，且包含经酵母同源重组整合到基因组上的9个基因片段。本发明构建四敲酵母菌株，为生产β-胡萝卜素提供优化的宿主细胞，选取不同来源的番茄红素环化酶crtY并配合特定来源的合成番茄红素的功能基因crtE、crtB和crtI，及特定的酵母内源基因等，经模块化设计整合至四敲酵母菌株基因组上，获得一株全新的高产β-胡萝卜素的重组菌株。

主权项

一种重组酵母菌株，其特征在于，所述酵母基因组敲除gal1、gal7、gal10和ypl062w基因，且包含经酵母自身同源重组整合到其基因组上的如下基因片段：酵母trp1位点上游同源序列、CYC1终止子、Bt crtI、GAL10启动子、GAL1启动子、Pa crtB、PGK1终止子、酵母trp1位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段1；酵母ypl062w基因上游同源序列、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、CYC1终止子、Bt crtI、GAL10启动子、GAL1启动子、Pa crtB、PGK1终止子以及酵母ypl062w基因下游同源序列顺次拼接而成的基因片段2；酵母leu2位点上游同源序列、LEU2标记、TDH2终止子、ACT1终止子、截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1、GAL10启动子、GAL1启动子、Tm crtE、GPM1终止子、酵母leu2位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段3；基因片段3中TDH2终止子及其上游同源序列、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、CYC1终止子、Bt crtI、GAL3启动子、基因片段3中ACT1终止子及其下游同源序列顺次拼接而成的基因片段4；酵母his3位点上游同源序列、HIS3标记、ENO2终止子、ACT1终止子、截短的HMG‑CoA还原酶基因tHMGR1、GAL10启动子、GAL1启动子、融合基因BTS1‑ERG20、FBA1终止子、酵母his3位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段5；酵母YGLCtau3位点上游同源序列、hphA抗性标签、IDI1终止子、基因IDI1、GAL7启动子、PDC1终止子、Sa PMK、GAL10启动子、GAL1启动子、Sa MK、HXT7终止子、酵母YGLCtau3位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段6；酵母gal7基因下游同源序列、nat抗性标签、ERG13终止子、基因ERG13、GAL7启动子、ERG19终止子、基因ERG19、GAL10启动子、GAL1启动子、基因ERG10及其终止子、酵母gal1基因下游同源序列顺次拼接而成的基因片段7；酵母YMRWdelta15位点上游同源序列、GAL1启动子上游激活序列UAS、GAL1启动子、成团泛菌来源或杜氏盐藻来源或雨生红球藻来源的crtY基因、ADH1终止子、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、YMRWdelta15位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段8；酵母YNRCdelta9位点上游同源序列、GAL1启动子上游激活序列UAS、GAL1启动子、成团泛菌来源或杜氏盐藻来源或雨生红球藻来源的crtY基因、ADH1终止子、DR‑Kl URA3‑DR营养标签、YNRCdelta9位点下游同源序列顺次拼接而成的基因片段9。